• ベストアンサー

グラジエントミキサーの自作方法を教えてください

酵素の精製でイオン交換カラムクロマトグラフィーを使いリニアグラジエントを作成して溶出させようと思っています。ところが私の研究室にはちょうど良いサイズのグラジエントミキサー(2つの筒が底でつながっている実験器具)がありません。自作方法についてご存知の方がいれば教えてもらえませんか?

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
回答No.2

サイホンの原理を利用すれば、底同士がつながっていなくても、ビーカー同士を、バッファーで満たしたU字のガラス管や、その他のチューブで縁越しにつなげば、サイフォンの原理で二つのビーカーの液面の高さは同じになりますから、片方から取り出していけば、もう片方から補うように流入してきて、グラジエントを作ることができますよ。 もちろん、少なくとも取り出す側のビーカーは、スターラーで撹拌する必要があります。

uhitomi
質問者

お礼

参考になりました。早速やってみようと思います。

その他の回答 (1)

  • MIYD
  • ベストアンサー率44% (405/905)
回答No.1

ペリスタポンプ2台を同期させて動かせるのでしたら、 後はT字でチューブをつなげればできますよ。 それも無いのでしたら、 グラディエントなどといわずに、 ステップワイズで(自分で50,100,200,500mMのNaClなどをつくって)溶出したほうが再現性があっていいと思います。

関連するQ&A

  • 酵素精製 : 溶出ピーク

    DEAEを使って酵素精製をしています. リニアグラジエントで用いるバッファーのpHを, pH 9からpH 5.5に変えると, 溶出ピークは遅くなるのでしょうか? (溶出塩濃度は同じです.)

  • 陰イオン交換クロマトグラフィー;早急な解答求!!!

    イオン交換クロマトグラフィー;至急解答おねがいします。 いま、ある酵素を精製しているのですが、陰イオン交換カラムから溶出後の失活が目立ち、先生から、「移動相に対イオンをいれなさい」との助言を得ました。原理的な理由がわからないので教えてください。明日には実行したいのですが、先生も出先で連絡がとれないので困ってます。ネットで調べても参考になる情報がみつからないのですが、これは一般的なことなのでしょうか?どうかよろしくお願いします。

  • 酵素の精製

    DEAE-クロマトグラフィーで粗酵素液を精製しました。そして、ある特定の酵素を精製して取り出しました。でもまだその酵素以外にもまだいろいろ混ざっているということでさらに精製する必要があるんだと思います。そのように更に精製を進めるためにはどんな方法が有効とされますか?まさかもう一度DEAE-クロマトグラフィーで精製するのですか??  また、(粗酵素液流入後)なぜNaClの濃度の違う緩衝液をその陰イオン交換体カラムにNaCl濃度の低い順に流しいれていったのかよくわかりません。

  • アフィニティークロマトグラフィーについて

    アフィニティークロマトグラフィーにおいて,塩(NaCl)濃度で物質を溶出させることができるのはなぜでしょうか? 基質アナログを固定相に用いて,酵素を溶出させています. 溶出は塩濃度のグラジエントで行っており,ちゃんと溶出するのですが, 塩濃度で溶出する理論が分かりません. また,塩濃度以外ではどんな方法で溶出させることができるのでしょうか?

  • タンパク質の精製カラム

    タンパク質の精製カラム(イオン交換クロマトグラフィー・アフィニティークロマトグラフィー)などのカラム(ガラス部位)の定義などあるのでしょうか?うちの研究室で用いるカラムはイオン交換の方が細長く・アフィニティーの方は太めという特徴があります。 逆のカラムを用いたらどのようになるのでしょうか??? イオン交換→太めのカラム アフィニティー→細長いカラム この様に交換した時の変化について教えていただきたいと思います。

  • タンパク質の精製 アフィニティにくっつかないんですが・・・

    はじめて質問します。学生です。 原株からあるNADPH依存のタンパク質を単離精製しているんですが、収量が少なく、より良い精製法を検討中です。 NADPH特異性のあるCibacron Blue F3GA色素を担体リガンドとした、いわゆるBlueカラムを試したのですが、目的酵素が結合せず、うまくいきません。(正確には少し結合しているようで単ピークで溶出するのですが、素通り画分の方が酵素活性が高い状態です。ベット量はカラムのタンパク質結合容量以下でやっています。) 至適pHのリン酸バッファーで、KClでグラジエント溶出しています。 (カラムの説明書通りの条件です。ただし説明書ではアルブミンを精製しています。) 結合しない原因は何なのでしょうか? 或いは陥りやすい操作ミスなど、少しでもわかる方は是非教えてください。 また、文献を探したところ、酵素溶液に基質を加えたり補酵素を加えたりすることで結合容量が増すようなことが書かれているものもあったのですが、その他に検討すべきことはあるでしょうか? ご存知の方いましたら、ご教授願います。

  • 陰イオン交換クロマトの担体が乾燥してしまった

    オープンカラムを用いた陰イオン交換クロマトグラフィーで酵素を精製しています。 担体はDEAE-TOYOPERLです。 先日、精製をしようと普段使っているカラムを開けたら、バッファーが枯れていて担体が直接空気に触れている状態になってしまいました。 以前先輩から「担体は絶対乾かさないように」と言われていたので「もしかしたら使えないのではないか…」と不安です。 新しいものを詰め替えれば良いのでしょうが、ちょうど担体が切れてしまっていて…。しかも年末ということもあり、すぐに発注しても届くのは来年になってしまうでしょう。 急いで精製したいので焦っています。一度バッファーが枯れた担体でも再利用できるのでしょうか?

  • クロマトグラフィーについて

    アフィニティーとイオン交換クロマトグラフィーによる目的たんぱくの精製のために、アフィニティクロマトグラフィーではガラスのカラムにゲル(疎水的相互作用クロマトグラフィーに対する分離培地)を使用している。なぜなら、扱っているたんぱく質に疎水的な部分が多数あるため。 一方、イオン交換クロマトグラフィーのほうは、フラグメントに分かれたたんぱく質の精製のためにまた、違うゲルを使っているらしいのですが、問題はカラムの(ゲルを詰める)長さなのです。 アフィニティーは、太めで短いカラムに対して、イオン交換では、細く長い物を使用しています。 なぜでしょうか、ご指導ください。お願いいたします。

  • 酵素の精製について

    酵素の精製について、個人的に興味があって勉強をしています。 カラムを使用した酵素の精製では、溶出液の酵素活性を測定するとともに タンパク質を定量するとのことですが、 (1)酵素活性だけでなく、タンパク質も定量するのは比活性を求めるためですか? (2)一般的に、比活性がどのくらいになれば精製ができている、というような 値があるのでしょうか? よろしくお願いします。

  • ボルテックスミキサーについて

    ボルテックスミキサーがほしいです。ボルテックスミキサーとは迷惑電話のような音をたてながら高速旋回して内容液を撹拌する実験器具のことです。生物学の研究をしているのですが、このボルテックスミキサーが必要になります。このボルテックスミキサーを買い換えることになったのですが、金額的にどれくらいするのかも分かりません。参考になる指標がありましたら、教えてもらえると助かります。