電気泳動

質問

電気泳動でゲル切り出しをしているんですが、
泳動後ゲルの断面を観察すると、DNAがゲルの下ではなく、上の面に偏っています。
ローディングダイを使っているので最初は沈んでいると思うのですが、
こういった経験をした方いらっしゃいますか？
収量が重要なので、もしゲルの外に漏れているとしたら非常に問題です。
いつもはこんなこと無いんですが。。。
何か解決策はないでしょうか？
また原因は何でしょうか？

回答No.1

myahmyah · ベストアンサー

電気泳動後にゲルを染色した場合、ゲルの表面に近い上部や下部がよく染色されることがありますねぇ。
そういうことでしょうか？一つの意見として。

補足

そうです。
上部がほとんどですが、下部にもわずかにあります。
なぜでしょうか。
泳動中にゲルからDNAがもれだしていたら、
困るのですが、
そういった心配は要らないのでしょうか？

回答No.3

myahmyah

そうですか。だとすると経験ありません。
ウェルにしっかり入れば泳動中に漏れるという話はあんまり聞いたことが無くて。
私の場合、はじめはエチブロ入りのゲルで泳動していました。あるときエチブロ無しのゲルで泳動をして、電気泳動後にエチブロで染色したとき、いつもはゲルの下の部分を中心に染まっているのが、そのときはゲルの表面部が強い色を発していたので不思議に思ったことがありました。
泳動後に染色するとゲルの周囲から染色液が入り込むためだろうと思ったのを覚えています。
ローディングダイとDNAをよくピペッティングしていますか？下に沈むと思うのですが。
専門家ではないので、それくらいしか思いつきませんね。

回答No.2

myahmyah

電気泳動後に染色しているのですね？
であれば、もれている可能性は低いと思います。
もれるのであれば、横にももれておかしくないですよね？
しかし、横にもれているような様子は見たことがないでしょう？
問題ないと思います。
染色剤を予めゲルに溶かして電気泳動をしてみては？
おそらく下のほうを中心に染まるのではないかと思います。

補足

染色中に漏れていることはないと思います。
エチブロ入りのゲルでやっても同じ結果がでるので。
むしろ泳動中にもれている可能性が高いのではないかと考えています。
ローディングダイや電気の方向が問題なのではないかと考えています。