電気泳動での精製について

質問

電気泳動(PAGEなど)で
ＤＮＡとか酵素とかを分離させた後、
そのバンドの出ている部分を切り取って
精製をかけたいと思います。

しかし、PAGEの中から出さないと
精製したものとして分析できないので
ゲルから液中に出してやりたいのですが
このときになるべく損失なく
回収する方法は無いものでしょうか？

私が考えているのは、
ＤＮＡや酵素を通さない程度の
透析チューブにゲルの破片を入れておいて
横移動型の電気泳動容器で泳動させると
チューブの中でゲルからＤＮＡなどが流れて
そのあと遠心分離で上清を回収すると
精製がかかっているんでは？
とか思っています。

どうでしょう？
無理があるのでしょうか・・・。

回答No.3

mizu_atsu · ベストアンサー

＞蛋白は純化出来るかなと思いまして。

サンプルがある程度精製されており、同じくらいの分子量のものがなければできます。

＞でも電気泳動した時点で失活しますかね・・・。

変成させて流せば確実に失活します。
構造解析に用いられるわけがありません。
NativePAGEなら活性が残っている可能性が高いので解析はできるかもしれませんが、泳動距離がいろいろなものの影響を受けるので精製の確実性が下がると思います。

回答No.2

mizu_atsu

電気泳動で取り出せます。
アミノ酸シークエンスをやるときに使う方法です。
ゲルをある程度の大きさに切りとり、
片側にPVDF膜などを重ね、両側にろ紙を重ね
通常の電気泳動とは違う方向（垂直）に泳動すれば膜に転写されます。※使用するバッファー、膜は様々あります。専用の装置も販売されてます。
それをブロモフェノールブルーで染色すれば酵素のバンドが膜に見えます。※もちろん染色したり、普通にPAGEしたら活性はなくなりますけど。
損失の程度は扱うタンパクの泳動具合、膜への吸着具合により違うと思うのでなんとも言えません。

DNAのときは切り出し用の低融点アガロースがあります。
専用の抽出キットも販売されます。
キアゲンなんたら。

あと「ＰＡＧＥでの活性染色の方法」の方は解決済みですか？終わったのなら締めてくださいね。

回答No.1

kazu-ura

目的をきちんと書いてくれないとわからないのですが、いろいろなキットがあります。キットというほどでもないですが。ゲルを切り出す、あるいは泳動中にろ紙のようなものを差込み、吸着させるなど、抽出方法はさまざま。フナコシやコスモバイオで探したらいかがです？ただし、回収率の比較はわかりません。また、精製してどうするのか？で方法自体があっていないこともあるような。

補足

精製というか、
蛋白は純化出来るかなと思いまして。
でも電気泳動した時点で失活しますかね・・・。
構造解析に使う分には大丈夫でしょうか？