- ベストアンサー
電気泳動に至るまでの操作で
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
＞この最後の三つ目が真ん中に来るくらいで止める そのくらいがちょうど目的のサイズがきれいに見えるという意味だと思います。 ＞時間ではなくてＤｙｅ で判定する意味 もし時間ではかっていると、電圧が低かったりして泳動があまり進んでいなかった場合にみにくい状態で泳動を止めることになります。一方、Dyeが移動していれば泳動はきちんと進んでいることになります。まあ、いつも同じようにやるのなら時間ではかってもあまりブレないのかもしれませんが、Dyeの位置も確認した方がいいんじゃないでしょうか。
関連するQ&A
- RNAの電気泳動について質問です。
現在、テンプレートのDNA（長さは197bpです。）からT7ポリメラーゼ酵素を用いてRNAを合成し、精製したRNAの長さを電気泳動によって確認するという作業を行っているのですが、予測される目的RNAの長さは132塩基なのですが、実際のバンドは250塩基付近の辺りに単一バンドが出ました。RNAがヘアピン構造を取ると、自身の長さのバンドよりも早く流れるというのは経験済みですが、大きくなったのは始めてです。これは精製したRNA同士で多量体を形成しているおそれがあるという解釈でよろしいのでしょうか？ また、ウチの研究施設には、RNA用のマーカーや試薬がないために、DNAと同様に1×TAEバッファーでアガロースゲルの電気泳動を行いました。マーカーもDNA用のものを用いているので、あまりマーカーは当てにしなくてもいいのでしょうか？ あと、RNAを泳動する際に、1本鎖で流れるようにするテクニックとかありますか？これまでは、RNAを泳動前に95℃で10分ほど熱を加えてから泳動を行っていました。 ヒントでもいいので、ご教授お願いします。
- 締切済み
- 生物学
- 電気泳動での精製について
電気泳動(PAGEなど)で ＤＮＡとか酵素とかを分離させた後、 そのバンドの出ている部分を切り取って 精製をかけたいと思います。 しかし、PAGEの中から出さないと 精製したものとして分析できないので ゲルから液中に出してやりたいのですが このときになるべく損失なく 回収する方法は無いものでしょうか？ 私が考えているのは、 ＤＮＡや酵素を通さない程度の 透析チューブにゲルの破片を入れておいて 横移動型の電気泳動容器で泳動させると チューブの中でゲルからＤＮＡなどが流れて そのあと遠心分離で上清を回収すると 精製がかかっているんでは？ とか思っています。 どうでしょう？ 無理があるのでしょうか・・・。
- ベストアンサー
- 生物学
- アガロースゲル電気泳動時にサンプルやマーカーが浮いてしまいます。。。
アガロースゲル電気泳動を行ってDNAやPCR産物のバンドを検出する際に、アプライしたサンプルやマーカーが泳動中にゲルから浮き出てしまい、解析できないことがしばしばあります。 dyeはBPBを使用していて、100Vで30分ぐらい泳動していますが、10分ぐらいでゲルに青色のバンドが全く残っていないという現状です。 バッファーは１×TBE,ゲルも１×TBEで１～２％アガロースゲルを通常毎回作成して使用しています。 サンプルの精製度が悪ければ浮いてくるという話は聞いたことがありますが、マーカーも浮いてきてしまうので原因が全くわかりません。 ほかの人は同じマーカーを使用していてもこのような現象はないということです。 ゲルの作成方法に問題があるのかと考えましたが、全くわかりません。 考えられる原因をいろいろと教えていただければ、大変助かります。 どうぞよろしくお願い致します。
- 締切済み
- 化学
- RNAの電気泳動
RNAの電気泳動についての質問です。 RNAをin vitroで作成し、できたRNAが目的の長さのものかどうか、スメアとなっていないか確かめるために行っています。マニュアルどおり（アガロースホルムアミド、サンプルにエチブロを混合）にやっているのですが、なかなかバンドが出てくれません。 (1)1レーンあたりサンプルRNAを2μg（吸光度より）流しているのですが、バンドが見えません。RNAだとDNAに比べてバンドが出にくいとかあるのでしょうか？5μg流したところでやっとバンドらしきものが見えました。 (2)さらに市販のRNAマーカーもバンドが出ません。マニュアルどおり1レーンあたり2μl使ってもバンドがなく、10μl使っても同様に見えませんでした。なにが悪いのでしょうか？RNaseには気をつけているつもりなのですが・・。マーカーが出ず、サンプルのサイズが不明なままなのです。なにか良い方法はないでしょうか？ DNAをメインに扱っていたもので疎い部分もありますが、よろしくお願い致します。
- ベストアンサー
- 生物学
- 電気泳動DNAシークエンシングのサンプル濃度(蛍光標識)
私は，レーザーの研究をしている学生です．化学やバイオでは全くの素人です． 現在，私の作製したレーザーを電気泳動DNAシークエンシングに応用することを考えています．蛍光標識したDNAに私の作製したレーザーを照射して蛍光を測定する実験を予定しています．即ち，装置を作るエンジニア側からの質問です． そこで知りたいことは，実際に電気泳動DNAシークエンシングでは，ゲル中でどれくらいの濃度のサンプル(DNA，標識色素)を測定しているのかということです． １，泳動するDNAの濃度(泳動中のゲルの中での濃度)はどれくらいのオーダーなのでしょうか？ ２，DNAひとつに対して標識蛍光分子はひとつだけ結合するのでしょうか？ 泳動の前処理でのDNAの濃度は 0.数μg/μLにする等という説明を見たことがありますが，DNA数濃度では何個/L程度になるのでしょうか？DNAの質量は長さで全く異なるのではないのでしょうか？ できればmol/Lで知りたいです． 些細な情報でも構いません．よろしくお願いいたします．
- 締切済み
- 生物学
- nanodropの測定精度について
いつも御世話になってます。 nanodropでDNA濃度を測定しているのですが、電気泳動での濃度と著しく一致しません。 nanodropでは1μg/μl以上の数値が出るのに、泳動してみると数百ngしか出てこないんです。 何度もやっているので、泳動の技術的な問題ではない気がするのですが。 nanodropは核酸を測るものなので、RNAが多いのかとも思ったのですが、泳動ではRNAはでてこないし、RNaseも添加しているためそうとは考えにくいのです。 また、通常DNAの260/280比は1.8くらいらしいのですが、私の場合では1.9代がほとんどで、260/230比も2.3付近と高い数値が出てしまいます。 どなたかご助言いただけたら幸いです。
- 締切済み
- 生物学
- 植物のRNAの泳動バンド
植物の胚と葉からkitをつかいRNAを抽出し、変性ゲルで泳動したのですが葉のほうはバンドが２本、胚の方はバンドが４本でました。なぜでしょうか？コンタミしているのでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
ありがとうございます！ Ｄｙｅの位置で判定するのは分かるのですが 見やすい位置って人によって違っていて それによって5～10分くらい差があるのです。 そこが悩むところ・・