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タンパク質と安定性
ryumuの回答
補足読みました。 ＞ nativeな構造をとるタンパクを精製するためには分泌させる必要があるということなのでしょうか？ これは説明が足りなかったかもしれません。 一般に細胞内は還元的環境なので、細胞内に存在する蛋白質にはS-S結合は無いと言われています。 細胞内蛋白質を扱うときにDTTなどの還元剤を用いるのもこのためです。 従って、細胞内に存在する蛋白質を異種発現させるのに、細胞外に分泌させると酸化されて不必要なS-S結合が起こりうるため分泌発現は不適切でしょう。 一方、S-Sが存在する蛋白質の場合は、分泌生産させると、分泌過程で適切なfoldingを起こす機構が働いて正常な蛋白質を得ることが出来る可能性が高いです（発現させる種により相性があるようですが）。 ＞ HisタグがpH8で安定ということでよろしいのでしょうか？ Hisタグを用いた精製は、レジンにくっつけた正に帯電した金属イオンとの配位結合をさせることで行います。 一方、His側鎖のpKa値は６付近ですので、pH８だとほぼ電荷を失っています。 この状態だと、金属と配位ができますが、pH６以下だと、Hisが正電荷を持つため金属と反発し結合できず、精製できません。 つまり、pH８が適してるというのは、タグのHisが電荷を持たず、かつ中性に近いから、ということです。 もちろん高いpHで蛋白質が安定なら、pHをもっと上げることでより特異的吸着をさせることが出来ます。 また低いpHでも安定ならば、一度高いpHでレジンに吸着させて、洗浄後、pH５～６程度の緩衝液で溶出させることも可能です（イミダゾールを使わないでよい）。
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お礼
ありがとうございます。大変参考になりました。