電気泳動によりDNAの分子量を求める方法。

質問

先日、実験でDNAの電気泳動を行いました。
それで、電気泳動の結果からDNAの分子量を求めなくてはならないのですが、いまいちよく分かりません。

電気泳動をしたのは標準マーカーと制限酵素処理する前のDNA、した後のDNAです。
標準マーカーはバンドが23、9.5、6.5、2.3、2.0に現れました。
制限酵素処理前のDNAはバンドが9.5に現れました。（した後については事情により省略させてください。）また、単位はKbpです。
自分でも考えてみたのですが、DNAの長さが分かっただけで分子量がどのように得られるのかさっぱり分かりません。
この結果からどのように分子量を求めていけばよいのでしょうか？
どなたかご教授願えませんでしょうか。よろしくお願いいたします。

回答No.3

Dr_Hyper · ベストアンサー

制限酵素処理する前のDNAはlinear DNAですか？plasmidだと制限酵素処理前だと環状をしていますので、正確なDNAの長さがでません。オープンサーキュラーとクローズドサーキュラーというやつです。制限処理をした後のバンドの長さの合計でDNAの全長を算出し、それに660をかければOKです。
ちなみにx660というのはbase pairtあたり660ということで、塩基base (A T G C）の平均分子量がだいたい330ということからの概算です。

お礼

お答えありがとうございます。
あと、お礼が遅くなってしまい申し訳ありませんでした。
処理前のDNAはlinear DNAでしたから大丈夫でした。
おかげで何とか分子量が求められました。
また、なぜ660を掛けるのかも教えていただき本当にありがとうございました。

回答No.2

ebikichi

１）泳動したサンプル量（g数）が既知ならバンドの位置からモル数がわかります

２）分子量マーカーの中には　既知の物を制限酵素処理したものがあります
23＋9.5＋6.5＋2.3＋2.0＝43.3kbpの標準品を酵素処理したものではないでしょうか？　各バンドの分子数は同じですよね
9.5のバンドとご自分のサンプルのバンドの濃さでおおよその見当をつけてください

お礼

ご回答ありがとうございます。
あと、お礼が遅くなってしまい申し訳ありませんでした。
しかし、何とか分子量を求めることが出来ました。
本当にありがとうございました。

回答No.1

noname#37403

正しいかどうかは、分かりませんが自分は以下の方法を用いています。
まず酵素処理した後のバンドの位置とマーカーの位置から、ベクター及びinsertの長さ（bp）が分かるはずです。また、１bp当たりの平均分子量（自分は自動的に６６０としていますが）を用いると自ずと分子量が分かることにんなります。

お礼

お答えありがとうございます。
あと、お礼が遅くなってしまい申し訳ありませんでした。
ご回答を読み、何とか分子量を算出することができました。どうもありがとうございました。