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DNAクローンと過剰発現について
masatoshioの回答
- masatoshio
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挿入するDNAフラグメントは、当然、目的に沿って「特定」されていませんか？ 「特定のヒト遺伝子」ですから、既に特定されているものと思うのですが、どういう事でしょう。 もし、そのフラグメントがプラスミドに挿入されているかどうか特定する、という事ならば、挿入処理をしたプラスミドを用いて挿入したDNA配列と挿入予定部位をまたいだプラスミド配列を含む部位でPCRを掛けて確認するなどの方法があります。 また、プラスミドに挿入されたフラグメントがE.Coliにトランスフェクションされているかどうかは、抗生剤培地を用いてフィルタリング(薬剤耐性部位のあるプラスミドを用いたとして)して確認する形になります。 プロモーターは、通常は挿入するフラグメントにあらかじめくっつけて置いてから、プロモーターとフラグメントの複合体をプラスミドに挿入する形にするものかと思います。
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