凍結全血から核酸抽出は一般的でしょうか。

質問

全血（抗凝固剤：クエン酸Na)から、RNAを抽出しようと思っています。
抽出には市販のキットを用いる予定です。

そこで質問なのですが、
採血から抽出までの時間は、より短いほうが良いとは思います。
しかし保存しなくてはならない場合、「何℃で何日くらいは大丈夫でした」という情報や経験をお持ちの方がおられましたら、情報をいただけたらと思いました。

また、キットメーカーに問い合わせたところ、上記の情報は持っておらず、「凍結すれば長く持ちますよ」との回答。
「凍結していいのか？」「データ的にはどうなのか？」等、質問しましたが、納得のいく回答が得られませんでした。

現在、全血を凍結するというのは一般的なやり方になっているのでしょうか。

ご存知の方がおられましたら、どうぞ宜しくお願いいたします。

回答No.1

geneticist12 · ベストアンサー

血液をあつかったことはないですが、
サンプルは採取後、ただちに適切な処理をしないと、生理条件とは違う遺伝子の発現が起こったりRNAの分解が起こったりしてしまいます。
急速凍結、ディープフリーザで保存というのは良くやる方法ですが、全血だと凍結融解によって壊れた血球細胞からRNAが外液に流れ出してしまうでしょう。全血にたいしてそれに見合うだけの抽出試薬を加えてRNA精製するならそれでも良いかもしれませんが（ボリュームがものすごく大きくなりますが）、普通は血球を回収してからやることと思います。

なので、一つの方法は、全血を採取したら速やかに血球を回収してその状態で凍結保存するということが考えられます。
もっとスマートなのは、生組織のRNAを安定化して保存できるRNAlaterという試薬を使う方法です。全血に加えて室温で数日間、-20℃で長期間保存できます。-20℃では凍結しなかったはずなので、凍結融解による細胞のバーストは起こらないのだと思います。RNA抽出直前に、血球を回収して進めます。

http://www.ambion.com/techlib/tn/122/7.html
http://www.ambion.com/catalog/ProdGrp.html?fkApp=13&fkProdGrp=51

お礼

早速の回答をありがとうございます。
URLも大変参考になりました。

教えた頂いた情報を勉強し、チャレンジしてみます。
ありがとうございました。