凍結組織からのRNA抽出

質問

凍結組織(ヒト）からのRNA抽出を考えています。
RNAlater-ice kitのようなRNA安定剤を使用し、キットを用いて抽出する方がいいのでしょうか？あるいは凍結のまま、乳鉢等で破砕してキットにかける方がいいのでしょうか？
また、おすすめのキットがあればあわせて教えてください。

回答No.2

noname#246619

我々のラボでは、大量の場合AGPC法の試薬を自作、少量であればISOGENなどの調製済試薬を使用し、ある程度小さく砕いた凍結組織に試薬を入れてホモジナイザーにかけてます。

お礼

ご回答ありがとうございました。
凍結組織を扱っている際に、解凍してしまうのが心配だったのですが、凍結のまま行っても大丈夫なのですね。

回答No.1

noname#160718

私だったら、-80℃で凍結した臓器をそのままビーズショッカーにかけて破砕し、その乳剤からISOGEN-LSという核酸抽出剤(ニッポンジーン)を使ってRNA抽出をしています。

　私の場合、目的の遺伝子がいるかいないか判ればよい、というもので収量にはそれほど拘っていないので。
　多分この方法でかなり収量もいけているとは思うのですが。

　もし収量にシビアなのでしたら、いろいろな方法でRNA抽出を行い、収量を確認してから本実験に入った方が良いでしょうね。

　なお、ISOGEN-LSは検体あたりの金額が安いので私は昔から愛用していますが、いわゆる「キット」ではないので、クロロホルムとイソプロ、エタノール、さらにＴＥは自分で用意しておく必要があります。私はＴＥ使わずに水でやってますが。

お礼

ご回答ありがとうございました。jagar39さんがおっしゃっているように収量とあと精製の高純度が必要になってくるのでいろいろな方法で
RNA抽出を行ってみたいと思います。凍結組織をそのまま使用できる方が簡便なので、それから試したいと思います。