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虫からのRNA抽出と確認方法
はじめまして。 ショウジョウバエからのRNA抽出、cDNA合成、PCRといった流れを行う予定です。 抽出キットを用いてRNAを抽出したのですが、抽出されたかどうか確認したいと考えております。電気泳動で流した場合、抽出産物はバンドとして確認できるのでしょうか?抽出量が少なくて確認できない場合もあるのでしょうか? また、バンドがでるとしたら、サイズはどのくらいに確認されるのでしょうか? 初歩的な質問ですみませんが、ご教授の程、よろしくお願いいたします。
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- cherry88
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回答No.1
Primerがしっかりあってればバンドが出ると思います。でも、ただ単にRNAが抽出されたのかを確認したいんでしたらSpectophotometryでRNAの量とかいろいろわかりますよ。 RNAがはいっていると思われる液を純水で50倍に薄めてそれをSpecにかけます。設定と計算は下記を見てください。 Wavelengthの設定はRNAは260です。 計算はA260 X 0.040 X df (ie 50) = RNA (µg/µl)って事になります。 ちなみにA260/A280で1.8ぐらいが目安ですよ!!1.8からあまりにそれる数字が出た場合はContaminationを考えましょう。