ウエスタンブロット転写ではボルト、電気泳動はアンペア

質問

こんにちは、よろしくお願いします。

仕事で電気泳動、ウエスタンブロットを行っています。

素朴な疑問なのですが、電気泳動で流すときは定電流（ｍA）で流し、
ウエスタンブロットで、ゲルからメンブレンへ転写するときは定電圧（V）で流すのはどうしてでしょうか？

どうしても分かりません。よろしくお願いします。

回答No.1

geneticist12 · ベストアンサー

そういう決まりはありません。逆のこともあります。
また、定電力（VA)で行うという選択肢もあります。

定電圧にしろ定電流にしろ、実験の条件を決めて、適当な条件を再現できればいいのす。

私はいつも逆で、電気泳動を定電圧、ブロットを定電流でやります。どちらも、通電しているうちに抵抗が下がって電流が流れやすくなります。ブロットはかなり大きな電流が流れますので、定電圧でやっているとそのうち、パワーサプライの容量を越える電流が流れて、安全装置が働いて止まってしまうからです。

お礼

geneticist12さん。度々ありがとうございます。
再現できる条件を探せばいいのですね。
ありがとうございました。

回答No.2

Chicago243

これは電気泳動、ウエスタンブロットもどっちで流しても条件さえ見つけていればうまく行きます。

電気泳動の場合定電流で流した方が、サンプルの流れるスピードが一定してます。しかし、バイオラッドとかの泳動そうは2枚セットできるのですが、1枚の時と2枚のときでながず電流がいっしょだと、2枚の方が時間がかかります。電流が一定だとだんだん電圧が上がってきて熱くなってきます。一定の電圧だと電流は徐々に下がってきます。流していて徐々に熱くなってプレートが割れたりというのが起こりにくいと思います。

ウエスタンブロットはサンプルの流れはあまり気にしなくて良いのですが、熱の出方は気おつけた方がいいです。そういう意味では定電圧はいい選択肢ですが、実際に定電流で流すひとは結構います。

お礼

ありがとうございました。