アクチンの保存法

質問

アクチンを-80℃で凍結保存して、再び解凍させるのに、構造が壊れないような良いbufferはないでしょうか？？
良い保存法が見つからなくてとても困っています。
経験者のかた、よろしくお願いします。

回答No.3

tir70 · ベストアンサー

解凍法については，何の根拠も私は持っているわけではありませんが，室温でしばらく放置して，固相がある程度小さくなったところで穏やかに揺すって全解凍し，ただちに氷に立てています．氷上解凍では，なかなか融けてくれず，結局しびれを切らして，体温でぬくもって解凍したことがあったかもしれません．

用途にも依りますが，私の場合は，解凍Gアクチンをすぐに重合し，そのまま使うことが多いです．また，知人は（アクチンの重合過程をモニターしていました），Gアクチンの解凍後，高速・短時間の超遠心に掛けて，その上清を回収して実験に使っていました．
miico-hさんがどういう実験を予定しているのか分かりませんが，実験内容からの要請を考慮し，実際に試行して得た結果を基にフィードバックして，プロトコルをチューンアップする必要があるかもしれないなあ，と思っているところです．

お礼

そうですか。
ありがとうございました。
とても参考になりました！！

回答No.2

tir70

アクチンの凍結に際しては，精製したGアクチンをそのまま凍結へ回すことが多いので，通常おおむね2-4mg/mlくらいです．そんな程度なので，「濃度を考慮する」という程には気にしていません．
凍結の際，クライオチューブを予め液体窒素で冷やした上で，少量の蛋白質溶液を注入して凍結してください．

補足

なるほど。凍結の仕方は分かりました。
その、ストックを解凍するときは流水解凍ですか、それとも
氷上解凍ですか？
また、解凍する時に不溶化してしまうなど、何か注意する点などあれば
教えていただきたいのですが・・・

回答No.1

tir70

わたしのところで実績のある方法は，Gアクチンを液体窒素で瞬間凍結し，液体窒素保存容器の気相中で保存するものです．ただし，瞬間凍結できるよう，Gアクチンは0.1mL/tube以下で分注しています．試しに1mL/tubeで凍結したら，解凍アクチンはあまりうまく重合しませんでした．
推測ではありますが，良い状態で凍結したGアクチンならば，しばらく（数日？数週間？分かりません）ならば-80℃で保存しても，それほど活性は落ちないような気がしますが，私は試したことがありません．

補足

ご回答ありがとうございます。
瞬間凍結の際に濃度は考慮されていますか？
参考にしたいです。