- ベストアンサー
酵母菌に 超音波破砕は有効ですか?
お願いします。 酵母菌を破砕し，体外には放出しない酵素を調べる計画 を立てています。当初ホモジナイザー破砕を予定していましたが， メガネ洗浄用程度しか準備できませんが，超音波破砕の方が有効 でしょうか。 また，他の方法があればお教えください。非加熱で生きたまま 簡易にかつほぼ完全に破砕できることを目標にしています。
- Ligandable
- お礼率89% (133/149)
- 生物学
- 回答数2
- ありがとう数3
- みんなの回答 （2）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
その他の回答 (1)
- elpkc
- ベストアンサー率53% (626/1160)
http://bio.tomys.co.jp/products/bio/ultrasonic_disrupter/index.html ですね。超音波出力200Wです。 かなり強力です。
お礼
ありがとうございます。 「予算が37年分かかる」さえなければ 是非欲しいものです。そういえば，秋葉原で 入手した工業用超音波モジュールあったような・・・
関連するQ&A
- パラドックス? 酵母菌の酵素分泌について教えてください。
菌類は，基本的に体外消化で栄養を得ているのは当然ですが，ブフナーのチマーゼ酵素群の例のように酵母が体外に分泌した酵素群は，グルコースを二酸化炭素が発生するまで分解してしまいます。 となると，グリセロアルデヒドリン酸からピルビン酸の過程はとうに過ぎており，体外で起きたこの過程で体内にATPを得ることはできません。糖を無駄に分解しているように見えます。 それどころか，細胞質基質における酵素群は，グルコースに活性化エネルギーを与えるためか，ATPを消費し，グルコースをフルクトース 二リン酸に変えています。酵母菌の体外で，この過程はいかにして 起こっているのでしょうか。 なにより，どのような点でチマーゼ酵素群の体外分泌は生存に有利なのでしょうか。 例えば，エタノールで他の細菌を抑えるからかもしれませんが， 体内で生産した代謝産物を体外に出してもいいはずです。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌の超音波破砕について
大腸菌でタンパクを発現させ、超音波破砕をし、遠心して上清を回収することで、目的のタンパク質を回収する方法があります。目的のタンパクは、GSTなどの可溶性の高いタンパクを結合させることによりペリプラズム間に移行させます。 ここで大腸菌の壊れている状態について確認させて下さい。 (1)超音波破砕をすると菌体も壊れるのですよね？ (2)ペリプラズムだけを壊すのには、透圧ショックが適切ですよね？ (3)超音波破砕した後、遠心した上清を回収したことは、ペリプラズム＆菌体内全部における可溶性の高いタンパクの回収したことになるのでしょうか？ また、上記の遠心後のペレットの方も上清画分と同様に、SDS-PAGEを行いました。ペレットにはかなり様々なバンドが濃く見えました。 (4)SDS-PAGEをすると菌体は全体が壊れると思いますが、これはSDS-PAGEにおいて泳動する前に、サンプルにSDSを入れてboilする過程において菌体が破裂するのですよね？ (5)界面活性剤（SDS）を加えただけでは、菌体は破壊できませんよね？(6)界面活性剤でペリプラズムのみ壊せているのでしょうか？ 長くなりすみません。菌体が全部壊れているのか、ペリプラズムだけ壊れているのかよく分からなくなってしまったのです。 (7)最後に、凍結粉砕という方法もありますが、こちらも菌体全部壊れますよね？ 大変こんがらがってしまいました。どなたか、よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 「うがい」の効果ってあるのですか？
インフルエンザの流行る今日この頃、ウチに帰ったら「うがい」を勧めるアレがありますが、この「ウガイ」って効くのでしょうか？ 「ガラガラガラ・・・ペッ」って吐き出すのは、その行動をとる せいぜい２～３分前にノドの入り口にあったものを洗浄するだけの行為じゃないでしょうか？ インフルエンザの菌や細かいホコリが、ずっとノドの入り口にとどまり、堆積してくれてれば、ウガイによって体外に放出されるでしょうが、とてもソンナこと信じられません。 口中に入ってきた端からドンドン器官内にとりこまれ、ウチに帰った頃にゃもう・・・。 って思うんですけど。 まあ、それでも、ウガイする１分前の汚れは落ちるでしょうから、やらないよりはマシかもしれませんが。
- ベストアンサー
- その他（健康・病気・怪我）
- 大腸菌の超音波破砕処理について
自分の研究室では大腸菌によるタンパクの大量発現の際の菌体破砕処理をする前に、－80度で一旦凍結させます。そうした方が破砕されやすいからと、説明をうけたのですが、なぜ破砕されやすくなるのでしょうか？？ 凍結させることによって大腸菌の細胞膜がもろくなるということなのでしょうか？？
- ベストアンサー
- 生物学
- ＧＦＰ融合タンパク質と抗体が反応しません。何か良い方法はないでしょうか？
A：以下に、実験方法を書いたのですが、どこに問題があるのでしょう? B：ＧＦＰやその関連のタンパク質の融合タンパクを使われた方で抗体と反応しなかったことはありますか？ Aについて、 酵母細胞内で、GFP融合タンパクを発現させて、 蛍光顕微鏡観察で発現を確認しました。 そこで、 ・WesternでGFP抗体と反応させてみたましたが、 バンドがでません。 ・免疫沈降後SDS-PAGEやって見てもだめでした。 条件を代え、 １：抗体濃度を変えたり、抗体反応も、オーバーナイトにしました。 ２：Westernの条件で、PBSをTBSにしたりしました。 ３：Westernで使うタンパク抽出方法は「サンプルbufferでボイル溶解」から、 「１：集菌した酵母にサンプルbuffer・プロテアーゼインヒビターを加え、加熱（100度）２：ガラスビーズを加え、ボルテックスで破砕、加熱、３：遠心」に。 抗体は、マウスIgＧを使っています。 B:について、 論文で、ある種のGFPとの融合タンパクはWesternでは 抗体と反応しなかった。 と書いてあったものがあると、人づてに聞きました。 やはりTagをHAやＭyc、Fragに変えたほうが良いのでしょうか? 長々とすみません。書き方が的を得ていないかもしれませんが、教えてください。お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 自分のメールアドレスから届いたメールによると、自分のPCが乗っ取られたとのこと。メールは削除したが、その後マイクロソフトの警告画面が表示され、金銭を要求されたので強制終了した。
- しかし、その後はPCが正常に動作している。自己あてメールを送信できたことから、本当にハッキングされたのか疑問が残る。
- 質問者はひかりTVのサービスやISPぷららについての質問として投稿している。
お礼
早速のお答え感謝します。 特に http://www.gelifesciences.co.jp/index.asp は大変参考になりました。 酵素法は魅力ですが，年間予算１万・・・ しっかり冷やしてホモジナイズするしか無いようです。 ありがとうございました。