大腸菌の形質転換について

質問

先日、「大腸菌の形質転換」の実験をしました。
pUC系プラスミドを用いました。

＜使用した培地＞
(1)LB培地のみ
(2)LB培地＋アンピシリン
(3)LB培地＋X-gal
(4)LB培地＋アンピシリン＋X-gal

＜予想＞
・-DNA
(1)白　(2)-　(3)白　(4)-
・+DNA
(1)白　(2)白　(3)青　(4)青

＜結果＞
・-DNA
(1)白　(2)-　(3)白　(4)-
・+DNA
(1)白　(2)-　(3)白　(4)白

＜予想＞は合っていますか？
＜結果＞では、なぜ(2)が-なのに(4)では菌は生えたのでしょうか？
形質転換自体は失敗してコンタミしたのでしょうか？

回答No.1

MIYD

pUC系と書かれていますが、アンピシリン耐性遺伝子とLacZが発現するベクターなのでしょうか
アンピシリン感受性で、IPTGの誘導がいらない大腸菌株を使っているのでしょうか
チューブ1本でトランスフォーメーションした後で、4等分して撒いたのでしょうか

予想の+DNA,(3)は微妙です
ベクターが入っていない大腸菌が山ほどいるので、ベクターの量によっては白の中に青がある状態になるかもしれません

結果の+DNA,(2),(4)の結果が違うのと(4)のコロニーが白いのは問題です
質問文に書いているようなコンタミかもしれませんし、
(コンタミした菌はLacZを持っていないのかもしれません)
(2)に菌を塗り忘れていたり、薬剤を間違えていたり、コーンラージ棒を熱いまま使って焼き殺したのかもしれません

お礼

ありがとうございました。解決しました。