大腸菌の形質転換とアンピシリン

質問

大腸菌の形質転換実験を行いました。
大腸菌のコンピテンとセルにプラスミドを導入させ、それをアンピシリン含有LB寒天培地で培養しました。
培養後、形成されたコロニーを採取し、次は、坂口フラスコ内でアンピシリンを加えた液体培地で培養しました。
ここで、培地にアンピシリンを添加する理由を教えていただきたいのです。
LB寒天培地にアンピシリンを添加するのは、プラスミドを導入した大腸菌のみを培養するためだと思います。
では、坂口フラスコでの培養でアンピシリンを添加するのはなぜでしょう？自分なりにいろいろ調べたところ、「プラスミドを抜け落ちないようにするため」ということを知りましたが、これはどういうことなのでしょうか？
なぜ抜け落ちるのか、なぜアンピシリンを添加すると抜け落ちないのか、ということがよくわかりません。
ご存知の方は教えて下さい。よろしくお願いします。

回答No.2

juns777 · ベストアンサー

プラスミドには目的遺伝子＋抗生剤耐性遺伝子（この場合アンピシリン耐性遺伝子）があるはずです。

１．コロニーを採取するまではアンピシリンが必要なのはわかりますね。プラスミドを持っているE.coliだけが生えるようにしているのです。

２．次に大量培養（まあ大量でなくてもいいのですが）、LB brothで培養するときには何がおきるでしょうか。

E.coliの分裂増殖です。アンピシリンがあると、プラスミドをもっているE.coliのみが増えますよね。アンピシリンでプレッシャーをかけていないとプラスミドがないE.coliがたまたま出来ると大量に増殖するのです。プラスミドの入ったE.coliが負けてしまうのですね。一般に抗生剤が入っていない培地で買い続けるとプラスミドは失ってしまいます。マニュアルや「バイオ実験イラストレイテッド」にも載っていたと思います。

ご参考になりましたら幸いです。

お礼

回答ありがとうございました。
詳しく説明していただき、理解も深まりました！

回答No.1

mizu_atsu

＞「プラスミドを抜け落ちないようにするため」ということを知りましたが

抜け落ちないのではなくて
抜け落ちてしまったものが増殖できないようにするためです。
分裂を繰り返すうちにプラスミドが欠落してしまう個体がいるのです。

お礼

回答ありがとうございました。
いったん取り込んだプラスミドが抜け落ちるのではなく、遺伝的にプラスミドを持たないものが出てくるのですね。
ありがとうございました！