ｃＤＮＡのクローニングについて

質問

抗体Aと結合するタンパク質をコードする遺伝子（ｃＤＮＡ）をクローニングする方法を教えてください。

実はこれはある問題で、「ＰＣＲ、アミノ酸配列、プライマー、精製、データベース」の用語を用いて説明するように書いてあるのですが、インターネットで「ｃＤＮＡクローニング」といれて検索しても、詳しく中身が書いていなくて、よく分かりません。

自分なりに考えてみると、「タンパク質を精製して、そこからｃDNAを抽出し、それをプライマーを用いてPCRで増幅させ、塩基配列を調べて、・・・。」
問題に答えているのか、合っているか分からないですし、行き詰まってしまいます。
タンパク質を精製する方法や、タンパク質からｃDNAを抽出する方法があるのかも分かりません。

長々と書いてしまいましたが、よろしくお願いします。

回答No.1

Freeuser · ベストアンサー

cDNAって何だかご存知ですか？cDNAというのは、細胞内のmRNAを逆転写酵素（reverse transcriptase）をもちいて、その相補的なDNAを作ったときのそのDNA鎖のことです。通常の転写はDNA→RNAの順ですが、この場合はRNA→DNAなので「逆」転写なわけです。「相補的」にあたるcomplementaryの頭文字をとってcDNAというのです。

さて、具体的な方法ですが、細胞内からmRNAを抽出・精製してきます。この段階ではまだいろいろなタンパク質をコードしているmRNAが混ざっています。抗体Aをコードする遺伝子の塩基配列を、データベースを使って調べます。そして、その塩基配列からプライマーを作成して、逆転写酵素に、目的のDNAだけを作らせます。次に、別のプライマーを入れてPCRにかければ、そのDNAのみがどんどん複製されて、目的の遺伝子がクローニングされます。

お礼

考えていたら、分かりました。
逆転写酵素を使うときに、ｍＲＮＡを使うのですね。
すみません、冒頭で、「mRNAを逆転写酵素（reverse transcriptase）をもちいて、・・・」と書いてくださっていたのに。

実験をするうえでのいろいろな考え方も勉強できました。本当にありがとうございました。

補足

どうもありがとうございます。
おっしゃられるように、私の解答は、ｃＤＮＡのことがめちゃくちゃですね。ありがとうございました。

Ｆｒｅｅｕｓｅｒさんのお答えなのですが、
細胞内から抽出精製したｍＲＮＡがその後の工程の、どこに使われているのかが分からないので教えてください。すみません、お手数おかけします。

回答No.2

Grace-Wonder

http://www.iam.u-tokyo.ac.jp/bnsikato/protocols.html
をご覧下さい。

参考URL：

http://www.nurs.or.jp/~academy/igaku/a/a624.htm

お礼

ありがとうございます。
ｃＤＮＡクローングもＤＮＡクローニングも同じことなのですね。そっかー。
私の頭の中はがちがちになっているようです。
でも、いろいろ考えているうちに、研究のやり方は一つじゃないような気がしててきました。（いまさらです・・・。）大学で先生に言われる手法が唯一のものかと思っていました。
いろいろな方法の中で、効率的、経済的な手法を選ぶのが研究者の技量なのでしょうね。
もうちょっとこの問題、考えてみます。
どうもありがとうございました。