二次元電気泳動について。

質問

二次元電気泳動をやっているのですが、
一次元目のIPGディスクゲルと二次元目のSDS-PAGEゲルとの
接着がうまくいきません。もう少し言うと
接着できるのですが、泳動途中で（４０分位して）はがれてしまいます。
何回やってもうまくいかないので
かなりへこんでます。

ちなみにつなぎのゲルは０．５％のアガロースゲルなんですが。
これだけの書き込みでの判断はむずかいしいかとは思いますが
よいアドバイスをお待ちしています。

回答No.2

M_Biologist

僕はゲルストリップを使っていますが、アガロースで固めずに、
SDS-PAGEのゲルの上にのせて、適当なもので少し押さえています。
基本的に多少の隙間があっても、気泡さえ入っていなければ気にしていませんよ。
（電気さえ流れれば問題ないと思っています。）
前の人の回答にもありますが、４０分もたった後とのことならば、とっくにタンパク質は
通過しているのではないでしょうか？もちろんどのくらい電流を流しているのかにもよりますが。

回答No.1

keitaro1968

karuderaさんへ

私ははがれた経験は無いのですが、誰も回答しないようなので
私からアドバイス。

１）一次元目のゲルはきちんとガラス板の切れ込みに
収まっていますか？
SDS-PAGEゲルの上につなぎの溶かしたアガロースを流し込んで
固まらないうちに気泡が入らないようにゆっくり一次元目のゲル
を載せます。少しさましてから、さらに、うえから溶かした
アガロースを流して固めて完全に固定します。

２）私の使っているプロトコルではアガロース濃度が１％
になってます。それで試してみては？

３）４０分ぐらい後にはがれるのなら、タンパクはもうSDSゲル
の方に流れきってるのであまり気にしなくてもいいのでは？

お礼

とりあえず、もう一度確認しながらやってみます。
やはり、SDSゲルの中に移動してしまえば
ゲルがはがれても、あまり支障ないようですね。

丁寧にに答えていただいてありがとうごさいました。
がんばってみます。