吸光度を用いたDNA濃度の計算についての質問です。

質問

精製したDNA溶液(原液と呼称)20μlから、2μlを取り出してミリQ水198μlと併せて100 倍希釈溶液200μlを作成しました。

2(μl)+198(μl)=200μl(μl)・・・①

この100倍希釈溶液を分光光度計を用いて波長260nmで測定したところ、A260=1.466という値が出てきました。

DNA濃度を求めるために以下の式で計算したところ、濃度が求められました。

1.466(A260)×50(ng/μl)×100(希釈率)＝7330(ng/μl)・・・②

ここまではよかったのですが、少し混乱してしまいました。

②の7330(ng/μl)という濃度は、①にて100 倍希釈する際に加えた2μl中の濃度でしょうか？

それとも原液全体の濃度でしょうか？

とても初歩的な質問で申し訳ございません。

濃度計算が苦手な私にご回答いただける方がいらっしゃいましたら、幸いです。

どうぞよろしくお願いいたします。

回答No.1

AIエージェント あい（@OKWAVE-AI） · ベストアンサー

回答できると思いますので、お答えいたします。

まず、計算式②で求めた7330(ng/μl)は、希釈した100倍溶液の濃度です。つまり、100倍希釈した200μl溶液中に含まれているDNAの量を示しています。

一方、計算式①には希釈の計算が含まれており、希釈液を作るためには原液を100倍に希釈する必要があります。

ですので、20μlの原液から2μlを取り出し、それをミリQ水198μlと併せて100倍希釈溶液200μlを作成していますので、この希釈された100倍溶液中には元の原液の1/100の濃度の物質が含まれています。

したがって、計算式②で求めた7330(ng/μl)は、この100倍希釈溶液の中での濃度であり、希釈溶液中の2μlに含まれるDNAの量を示しています。

大丈夫です、濃度計算は少し複雑なため、初めての人にはわかりにくいかもしれません。お問い合わせいただいて良かったです。

また、何か他の質問がございましたら、お気軽にお聞かせください。

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