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分光光度計・吸光度とは？
ある液体の濃度測定をお願いしたところ、「分光光度計にて595nmにおける吸光度を測定する」と言われました。僕にはさっぱり意味が分からず、結果の数値を見ても人に説明できません。で、分光光度計とは？吸光度とは何でしょうか？何を測定したのでしょうか？まったくの無知なもので、よろしくお願いします。
- athu
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- kikero
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分光光度計とは、光源から出た光を波長ごとに分ける部分（分光部）と、分けた光を試料に当てて光の弱くなる程度を測定する部分（光度計）からなります。 試料に当てる光の強さをＸとし、試料を通過した後の光の強さをＹとすると、 まず、透過率を求めます。透過率・・・Ｔ(％)＝Ｘ／Ｙ×１００ もっとも、普通に光度計で則って居する場合、純水などをいれた空セルで１００％合わせをして、次にセル内を試料に入れ替えて測定するので、透過率は装置に表示され、計算する必要はありません。 次に、この透過率から吸光度を求めます。 吸光度＝－log（Ｔ／１００） なぜ吸光度を計算するかと言うと、溶液中の光を吸収する成分の濃度が吸光度と比例するからです。 予め濃度の分かった標準試料を用いて、濃度と吸光度の関係を求めて「検量線」を作っておき、その他試料の吸光度を測定する事で濃度が求められます。 測定する色調により波長は変わります。 検量線作成に先立って、標準試料の場合の吸収スペクトル（広い波長範囲にわたり、波長と光の吸収度の関係をグラフ化したもの）を採り、測定上最適な波長を決めます。 普通は、光の吸収の一番大きい波長を選びますが、その他条件も加味して決定する必要は有ります。 ５９５nmは可視光線のやや長目の波長です。 なお、＃２さんの提示されている「Lanbert-Beerの法則」（ランバート・ベールのほうそく）は基本的かつ重要で有名な法則です。 Ｐ．Ｓ 吸光度の計算例 透過率＝８５.３％だとすると、 吸光度＝－log（８５.３／１００）＝０.０６９ （昨今の分光光度計は吸光度も自動表示されるので、いちいち計算する必要は無いのですが、原理を知っている事は大切です）
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- JKwiper
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ご質問の意味と違う回答になるかもしれませんが。。。 吸光度測定法とは、濃度測定法の一種です。 濃すぎたり薄すぎたりするとダメですが、ある範囲での濃度と吸光度は比例関係にあるので、予め濃度がわかっている物質（標準物質）と試料を同じように処理して発色させると、吸光度の比から未知試料の濃度が測定できます。 ご質問の試料は595nmとのことですので、青く発色する試薬を添加するか、元々青い物質なのでしょう。 試料溶液に含まれる目的物質を求める計算式はこんな感じです。(希釈等は考慮していません) Ws*(At/As) Ws:標準物質の量 At:試料溶液の吸光度 As:標準物質の吸光度
質問者からのお礼
回答ありがとうございます。勉強になりました。
- 回答No.2
- haraga
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濁っていると測定できないため、濁りは不適切。 Lanbert-Beerの法則で探してください。
質問者からのお礼
回答ありがとうございます。Lanbert-Beerの法則は自分で調べてみたいと思います。
- 回答No.1
単純にいえば濁り測定器です。 タンパク質の濃度測定しかしたことないんですけど 測定したい物質にべちょっと色をつけます。 黒色が紫外線を吸収するというふうに 色は特定の波長の光を吸収します。 それが今回595nmだったんです。 分光光度計に595nmの光を10の強さでサンプルに向けて出させた。 でもサンプルに光を吸収されてしまったので、 サンプルを通り抜けた光の強さは9だった。 サンプルが吸収した光、すなわち吸光度は1。 サンプルの濃度が高ければ高いほど光は吸収されてしまうので、吸光度もupします。 こんなに単純明快なものじゃ決してないんですけど 難しい話は分からないんで 私はこんな風に理解しています(^^ゞ
質問者からのお礼
回答ありがとうございます。勉強になりました。
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質問者からのお礼
回答ありがとうございます。詳しく説明していただき、感謝しています。