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ジェノタイピングでのプライマー
browntrautの回答
- browntraut
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ノックアウトをどうやって作ったかを考えれば答えが見つかります。 目的のゲノム遺伝子にある程度の長さの欠失、もしくは余計な遺伝子を挿入させ、遺伝子を発現できないようにさせています。 仰るように通常のPCRはプライマーはペア（2種類）ですが、KOのジェノタイピングなどの場合は、プライマーペアをこの欠失部分や余計な配列上にも設計します。 このような場所にプライマーを設計すると、欠失や余計な配列があると増幅したり、逆にしなかったりする訳です。 ワイルドタイプとはPCRパターンが違くなりますね？ もちろん、ワイルドタイプのバンドもちゃんとでるようなプライマーペアも必要です（PCRはOKプライマーと別々でもOKだし、PCRがかかることがわかっていれば、ミックスプライマーで一緒にPCRをかけられます）。 染色体は2本ですので、ワイルドバンドとOKバンドのパターンを見て、 WTxWT、WTxKO（ヘテロ）、KOxKO（ホモ）の3種類のゲノムがわかるようになります。
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