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ブタ血管内皮細胞の免疫染色について
実験で、ブタの血管内皮細胞を免疫染色で確認しようとしております。 CD34が血管内皮細胞の特異的な抗体と伺いましたが、自分の知っている施設には、人間に対するCD34抗体(anti-human)しかなく、これではどの程度染色されるか不明とのことでした。 またvWF因子というものもあると聞きましたが、これもブタの血管内皮細胞に対して特異性があるかは分からないといわれました。 ブタの血管内皮細胞の正常な染色所見を得るために、anti-humanのCD34抗体をつかっても良いものでしょうか？あるいはvWFの使用が良いでしょうか？ 当方このあたりの知識がまるでなく、回答に必要な情報が提示しきれていない恐れがありますが、その時はまた説明を追加いたしますのでよろしくお願いいたします。
- tkdtknr
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- otx
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免疫染色は、抗体の信頼性がもっとも大事です。 それが揺らいでるのであれば、出た結果は何を意味するのかわかりません。 市販の抗体には、データシートがあり、その情報に その抗体がどのような動物種のたんぱく質にまで反応するかとか 書いてあります。 それが無い限り（あっても慎重にしますが）、誰も大丈夫とは言えません。だから、 ＞これではどの程度染色されるか不明 ＞ブタの血管内皮細胞に対して特異性があるかは分からない これ以上のことは誰もいえないと思います。 きちんとした抗体を手に入れることををお勧めします。
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免疫染色初心者です．よろしくお願いします． 血管内皮細胞，線維芽細胞，心筋細胞の特異的タンパクを染めるのに，Von Willbrand factor(rabbit),DDR2(rabbit),α-actinin，２次抗体としてgoat anti-rabbit IgG等の抗体を用います．こういう場合の１次・２次抗体の濃度はやはりある程度100倍，1000倍なり自分で希釈してみて決めるしかないのでしょうか？他の方の質問も拝見して，自分で調べるしかないのかなとは思いましたが，どの濃度で一番反応が出やすいというのはないのでしょうか．よろしくお願いいたします．
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はじめまして。いつも参考にさせて頂いてます。 培養細胞での免疫染色で困っているので伺いたいのですが、現在核内の転写因子に対する抗体を用いて、培養細胞で免疫染色を行っています。 しかし、なかなかきれいに染まらず（核のシグナルが弱く、細胞質がぺたーと染まってしまう）困っています。 抗体は、マウスの組織を用いてきちんとワークしている（核がきちんと 染まっている）事を確認し、その細胞で目的の遺伝子が発現している事はリアルタイムRT-PCRで確認しています。 プロトコルとしては、 スライドガラスに細胞を貼付ける→4%PFAで固定(4℃、20分)→0.1% TritonX100で可溶化（4℃、15分） →3%BSAでブロッキング→１次抗体(4℃、O/N)→２次抗体（RT,1h）→ヘキストで核染色 各ステップ間にPBSで３回Washを行っています。 細胞質が染まる事は２次抗体のバックではない事は確認しました。 何か些細な事でも構いませんので、何か注意点等ありましたら、よろしくお願い致します。
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細胞骨格タンパク質の免疫染色についてお伺いします． ある細胞骨格蛋白（中間径フィラメント）の抗体を用いて免疫染色された正常組織の写真があるサイトに載っていました。その抗体の説明書には『局在；細胞質』と書いてあるにもかかわらずその写真では核にのみ染色性を呈しておりました．ちなみにそのサイトには同じ標本を別の会社の抗体でも染めているのですが、そちらの抗体を使用した写真では完全に細胞質のみが染色されております． そこで、細胞骨格蛋白（中間径フィラメント）の場合にのみ限定してお聞きしたいのですけれど、 1.このようなことが起こる原因としてどんな事が考えられますか？. 2.ご自分で実験された場合そのような結果が出た時はどう解釈しますか？ 何卒よろしくお願いいたします．
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回答ありがとうございます。やはり確実な抗体で染色すべきですか、、、。 時間と自分の技術の問題で染色は業者に依頼する予定ですが、対応する抗体をちゃんと使わないとやはりだめなんですね。