- ベストアンサー
サイクルシークエンス法について
DNA考古学の論文を読んでいるとサイクルシークエンス法という言葉がでてきました。このサイクルシークエンス法とは一体どのようなものなのでしょうか？もしくはシークエンスするとは一体どういう動作なのでしょうか？よろしくご教授願います。
- mac_or_win
- お礼率86% (13/15)
- 生物学
- 回答数1
- ありがとう数1
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
まず、シークエンス法とはDNAの塩基配列を読む技術のことです。 この技術で最近主流なのがサイクルシークエンス法で PCR生成物の塩基配列を読むことが可能なため、 少ないDNA量で正確に読めるという利点があります。
関連するQ&A
- サイクルシークエンス
現在TOPO Cloning kitで約3kbのDNA配列を解析しようとしています。大腸菌への形質転換までうまくいきサイクルシークエンスを行ったのですがうまく増えません。使用しているprimerはT7 primerとT3 primerでkitに同封してあり濃度が0.1microg/microLでこの二つを1ng/microLに希釈しています。希釈の仕方がいけなかったのでしょうか？またサイクルシークエンスの注意点等があったらよろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- ＤＮＡシークエンスのジデオキシ法について
シークエンスの一つであるジデオキシ法について教えてください。 ジデオキシ法では、鋳型ＤＮＡにプライマーが結合しそこから、酵素やdNTAやddNTPで様々な塩基配列が生じて、一番短いものから順に呼んでいけば鋳型ＤＮＡ相補的な配列が読みとれるそうですがこれでは元のＤＮＡの配列を調べたいのに調べてることにならないのではないでしょうか？？頭がこんがらがってしまっています。頭が悪いのでどうか教えてください。
- 締切済み
- 生物学
- DNAシーケンス ジデオキシ法
ジデオキシ法に用いるプライマーはどのように決定するのですか？ 塩基配列を知りたいからシーケンスを行うのだから、鋳型DNAに特異的なプライマーを設計するのは無理な気がするのですが… レベルの低い質問で恐縮ですが教えてください
- ベストアンサー
- 生物学
- 遺伝子解析で（シーケンス反応）
細菌から抽出したDNAをPCRで数を増やしますが、次に行うシーケンス反応の時もPCRと同じように温度を変化させた反応サイクルを繰り返しますよね。この時蛍光マーカされたddNTPがくっついた伸長停止した色々な長さのDNAができると思うのですが、その色々な長さのDNAを作るために数十サイクルも反応行うのですか？PCRの時はDNAが増えますが、シーケンス反応の時はDNA自体は増えませんよね？その時伸長停止したDNAは熱がかかった時に再度解けてしまうことはないのでしょうか。 又シーケンス反応の終わったサンプルを洗浄乾燥し、再溶解して自動解析機（キャピラリ電気泳動）にかけますが、移動するDNAは伸長の止まった２重螺旋の状態で移動しているのでしょうか？ それと、解析結果が例えばＡ・Ｇ・Ｔだったとしたら、ddNTPのＡ・Ｇ・Ｔが付いていたという事でしょうかそれともddNTPのＴ・Ｃ・Ａがついていたという事でしょうか。 色々聞いてしまってすいません。
- ベストアンサー
- 生物学
- プラスミドDNAの精製
シークエンス反応に使うプラスミドDNAを抽出したのですが、反応が十分に行かないのか、塩基配列をあまり読むことができません。サンプルのプラスミドDNAの純度に問題があるような気がするのですが、純度がよいDNAを抽出する方法を(経験)コツなどを含めてご教授願えますでしょうか。 プラスミドDNAは大腸菌から抽出します。シークエンス反応はサイクルシークエンス法です。泳動はアクリルアミドゲルで行っております。
- ベストアンサー
- 生物学
- oracle8iでのシーケンス作成
こんにちは。教えてください。 oracleのシーケンスなんですが、シーケンスを作成するときに cycleでmax値を超えると値が元に戻るっていうのがあると思うのですが、 それと同様に、たとえば2001年から2002年に変わったタイミングで シーケンスの値を1に戻す、という設定方法はあるのでしょうか。 よろしくご教授ください。
- ベストアンサー
- その他(データベース)
お礼
ありがとうございました。たいへん参考になりました。