遺伝子の組み換え

質問

１．恒温装置を用い、水の温度を４２℃にする。
　２．チューブ２本(ピンクと白)と形質転換溶液を氷水中につけて冷やしておき０℃の温度を確保する。
　３．火をつけたガスバーナーのそばで大腸菌を両方のチューブにそれぞれ加える。
　４．ピンクのチューブにプラスミドを加える。
　５．氷水上に１５分間入れ、速やかに４２℃のお湯に静置する。１～２分後、すぐに氷水中に戻し２～３分間する氷冷する。
　６．SOH培地溶液２６０μℓを両チューブに加える。
　７．３７℃のインキュベータ内で１５分間静置する。
　８．LBプレートを１番、LB/ampプレート３枚を２～４番とする。
　９．３番のLB/amプレートに、X-galを入れる。
　　　　　１番　LBプレート
　　　　　２番　LB/ampプレート
　　　　　３番　LB/ampプレート＋X-gal
　　　　　４番　LB/ampプレート
　10．プレートを逆さにし、３７℃のインキュベータに入れ、１日間静置する。

という実験をしたのですが、２番で大腸菌が検出され、３番と４番には色がついていませんでした。これはどういうことですか？教えてください。

回答No.1

MIYD · ベストアンサー

どのプレートにどのサンプル（白とピンク）を撒いたのでしょうか。
また、2番と4番のプレートの違いは何でしょうか。

おそらくAmp耐性遺伝子とLacZを含むプラスミドを導入したのだと思いますが、
これを撒いた場合、

1番のプレートは薬剤耐性遺伝子が入っていない大腸菌も増えるので一面に生えます。（大腸菌の量によってはコロニーが2番よりも圧倒的多数出てくるかもしれませんが）

2番のプレートはプラスミドが導入された大腸菌のみ増えることができるので、学生実習用に量が調整されているのならば、コロニーがたくさん出てくるはずです。

3番のプレートはプラスミドが導入された大腸菌内でLacZが発現し、X-galが分解されることによりコロニーが青くなるはずです。

3番のプレートに色がついていないということはX-galを塗り忘れたか入れたプラスミドにLacZが含まれていないと考えられます。
もしかしたらIPTGも一緒に入れていないために、LacZの発現量が少なくて青く見えないのかもしれません。大腸菌の株は何を使ったのでしょうか。

4番のプレートはもともとX-galが塗られていない為、青くはならないはずです。