ドデシル硫酸ナトリウムによる付着蛋白質の剥離実験をしているんですが・・・

質問

ドデシル硫酸ナトリウムによる付着蛋白質の剥離実験をしています、１％３％５％１０％で系日的に蛋白質量を調べています。そこで質問なんですが「１％の結果は吸光度が初日0.057、３日目0.068」「３％の結果が初日0.217、３日目0.232」「５％の結果が初日0.294、３日目0.304」「１０％の結果が初日0.284、３日目0.285」でした。この結果から出た疑問なんですが、なぜ５％の方が良く蛋白質が良く剥がれ１０％の方があまり剥がれていないのでしょうか？知識をお持ちの方、又はアドバイスでもぜんぜん結構なんでお返事お待ちしております。

回答No.3

hiroU

補足の質問に対してお答えします。
まず、BCA法は確かに界面活性剤の影響を受けにくい方法として知られており、一般的なタンパク質定量法になっています。しかし、それは「受けにくい」だけであって、「受けない」訳ではありません。お使いのBCA法の説明書を調べてみてください。そこには、界面活性剤の影響を受けない濃度が記されていると思います。私の記憶が正しければ、確かドテシル硫酸ナトリウムは５％が限界だったように思います。したがって、今回のように５％までのデータは信用できそうで、１０％のデータは怪しいという結果が生じた可能性が考えられます。
つぎに、有機溶媒により変性させると定量できないのでは？という御質問に対してお答えします。これに関しても、影響を受けやすい有機溶媒と受けにくい有機溶媒の説明が濃度とともに記述されているはずです。代表的な有機溶媒であるメタノール、アセトン、エタノールは１０％くらいまで大丈夫だったように思います。そもそもドテシル硫酸ナトリウムは有機溶媒よりも強い非常に強力なタンパク質変性剤です。したがって、変性してしまったから定量できないという可能性は低いとおもいます。
実験頑張って下さい！！

お礼

解説書や資料を探して読んでみたところ、ＢＣＡ法に関してもＳＤＳに関してもhiroＵさんのおっしゃるように書かれてありました。実験がんばります！ありがとうございました！