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分子生物学の実験が行き詰まりました
browntrautの回答
ベクター：XbaIカット インサート：NheIとXbaIのダブルダイジェスションでカット で、そのままライゲーション。 NheIとXbaIは結合 XbaIとXbaIも結合するため、リバースに入る可能性が50%。 インサートの丁度真ん中で切れないような（偏って切れるような）シングルカッターを見つけ、 その酵素がベクターにとっても１～２か所切れれば良いが、切れなければ、 インサートにはノーカッターだけれども、ベクターにはシングルカッターの酵素とともに ダブルダイジェスション。 バンドパターンを見て、順入りか逆入りを区別する。 多分これでイケます。 ところで、XbaIはメチル化の影響を受けますが、切るべきDNAはメチル化してませんか？ 配列は大丈夫ですか？
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お礼
PCR産物を制限酵素切断する事で判断するわけですね。ありがとうございますo(^▽^)o