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逆相HPLC
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逆相HPLCとのことですので、分子量と溶出順は関係ないはずです。 カラム充填剤との相互作用が弱いものから先に出てきます。 現在の条件でピークがきちんと分離できているのなら、アイソクラティックのままで良いと思います。 （グラジエントにすると、再現性が微妙にあやしくなることもあります。また、連続分析の場合は、安定化待ちが必要になります） このあたりは、装置メーカーのウェブサイトに解説があります。 (株)日立ハイテクノロジーズHPLC 基礎講座 http://www.hitachi-hitec.com/science/lc_basic/lc_course.html （今回のご質問だと、特に第1回と第4回が参考になるかと思います） (株)資生堂 カラムの選択 http://www.shiseido.co.jp/hplc2003/column/html/col_sele.htm
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