酵素活性の測定

質問

酵素活性を測定をしたのですが、予想よりも活性が低いという結果が得られました。
そこで、その酵素が本来有している活性自体が低いのか、あるいはサンプルに含まれる酵素の内、活性を持っているものが少ないのか（強制発現させた組み換え体を用いているため）を見分けたいのですが、どのような方法があるでしょうか？

回答No.1

stringf35

生化学が本業の者です。

「予想よりも」ということは、組織などから精製した標品などがあって、
その活性と比べてということでしょうか。その場合は、標品と活性を
比較すればいいだけですので、簡単ですね。

標品がない場合、なかなか難しそうですが、活性に必要なコファクター
などがあれば、その結合活性を指標に判断できるかもしれません。
たとえば、CaMKIIであれば、CaMの結合活性をチェックすることで、
活性型の割合を見積もることができますし、Ｇ蛋白質ならばGTPの
結合活性などが指標になると思います。

お礼

ご回答に対するお礼が遅くなってしまい大変申し訳ありません。

問題の酵素は、他の生物ですでに活性が測定されている酵素のホモログなのですが、その酵素自体の活性はこれまで測定されていません。そのため、「予想よりも活性が低い」と言うのは、前述のすでに活性が測定されている酵素と比べてということなので、厳密な意味での標品がありません。

そこで、stringf35さんが提案して下さったように、その酵素のコファクターがＲＮＡであることはわかっているので、まず、その両者の結合活性を比較してみることにしました。

私は発生、遺伝学が専門です。酵素活性の測定等、生化学的な実験に関する知識も経験も少ないので、手探りで実験を進めているなかで、丁寧に質問に答えてくださって本当にありがとうございました。