- ベストアンサー
PBMCの単球分離についてのお助けをお願いします
sachihappy777の回答
- sachihappy777
- ベストアンサー率34% (16/46)
同じくフィコールを用いてPBMCを分離しているものです。 PBMCから単球の分離はどのように行っておられますか？
関連するQ&A
- PBMCから単球分離する際に接着しません
「PBMCから単球の分離の際にフラスコに接着しない」について教えてください お世話になります。 PBMCから単球を分離する際、単核球1×10^7個程度得られました。 単核球を10％FBS含むRPMIに浮遊し、FBS処理したフラスコに注入し、37℃で1hr incubationしました。 接着細胞を回収しようと思い、顕微鏡でのぞいてみるとフラスコに接着している細胞が全くおらず、細胞は浮遊したままでした。 仕方がなく、浮遊液を回収して単核球として細胞を使用しました。 浮遊液回収後にも顕微鏡で確認してみましたが、細胞はおらず、やはり接着はしていなかったものと思われます。 どうして接着しないのでしょうか？ 教えていただけますか？
- 締切済み
- 化学
- PBMCからの単球の分離の際、細胞が接着しません
「PBMCから単球の分離の際にフラスコに接着しない」について教えてください お世話になります。 PBMCから単球を分離する際、単核球1×10^7個程度得られました。 単核球を10％FBS含むRPMIに浮遊し、FBS処理したフラスコに注入し、37℃で1hr incubationしました。 接着細胞を回収しようと思い、顕微鏡でのぞいてみるとフラスコに接着している細胞が全くおらず、細胞は浮遊したままでした。 仕方がなく、浮遊液を回収して単核球として細胞を使用しました。 浮遊液回収後にも顕微鏡で確認してみましたが、細胞はおらず、やはり接着はしていなかったものと思われます。 どうして接着しないのでしょうか？ 教えていただけますか？
- 締切済み
- 生物学
- 細胞サンプル調整方法を教えて下さい！
とっても困っています。 フローサイトで細胞を測定したいのですが、細胞数の調整に苦難しています。 セルカウンターででた細胞数： 2.0x10の6乗個/㎖ その全溶液量 ： 10㎖ いま自分が持っている細胞数の合計 2.0x10の7乗個/10㎖ ●1x10の6乗個の細胞を6個のエッペンに分注したい １．1個のエッペンへの分注量はいくつか ２．1個のエッペンに1x10の6乗個/100µℓとしたい場合は、何ミリの 溶媒（Buffer）を加えて希釈すればよいか ３．6（検体）÷20個＝0.307µℓと計算は何を求められますか？ とても困っています。どうか教えて下さい！
- ベストアンサー
- 生物学
- 細胞の数え方
こんにちは 今、細胞を使った実験をしています。 96wellプレートを使った実験なのですが 『1wellに細胞を0.7×10の４乗個入れなさい』 と指示がありました。 1wellが50マイクロリットル入るので 0.7×10の４乗/50マイクロリットル （この解釈の仕方でよいのかも自信がありません） まず、0.7×10の４乗/50マイクロリットルを 計算をしやすくする為に、1ミリリットル中には 何個入っているかを計算していたところ 次の二通りの意見が出てきました。 1) 0.7×10の４乗/50マイクロリットル は 14×10の４乗/1ミリリットル 50マイクロリットル→1ミリリットル(1000マイクロリットル) は20倍なので細胞も20倍した。 2) 0.7×10の４乗/50マイクロリットル は 35×10の４乗/1ミリリットル 0.7×50=35 どちらが正しいでしょか？ 私の意見は１番なのですが、あとの二人は２番です。 細胞のカウントの方法は独特なので、戸惑ってます。 『1wellに細胞を0.7×10の４乗個入れる』という意味の 捕らえ方も間違ってるのではないかと不安になってます。 とても困ってます(;_;) どなたかお詳しい方、または96wellに細胞を入れて実験されてる方 教えてください。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大学の分析化学の問題。非常に困ってます。。。
今期末テストの過去問解いてるんですが全然わかりません。教えてください！ １．０，０１００M EDTA溶液を１００ｍｌ調整するのに何ｇのNa2CH2Y・２H2O必要か。 Ans ０，３７２３ｇ ２、CaイオンおよびMgイオンを含む天然水１００ｍｌにｐH１０のNH4Cｌ－NH4OH緩衝溶液を２～３molとBT指示薬を加え、０，０１００M EDTA標準溶液で滴定した。２０．０ml滴定したところ最後の一滴で赤から青に変色した。水の硬度を求めよ。ただし水の硬度はCaイオンとMgイオンの含量の当量を測定し、これが全てCaイオンであると考えて求められる。CaO １ｍｇ/100mlを硬度１とする。 Ans ２．５０×１０の－５乗 M ２については緩衝溶液は２～３mlとアバウトに書かれていますので、ただ、緩衝溶液を加えたこと自体が重要で量はさほど問題になっていないと思われます。 ４行目のCaイオンとMgイオンを全て同じと考えられる、とあるので２つわけて考える必要はなさそうです。ここまでは（合っているか否かはわからないけど）推測できたのですがわかりません。 １につきましてはEDTAは１/1000mol必要だと思うのですが水和してますので、その分薄まってしまいますよね。そこはどう計算したらよいのでしょう？
- 締切済み
- 化学
- 細胞播種（96well)のコツを教えてください。
閲覧ありがとうございます。 今年10月にバイオ系の研究室に配属されました大学３回生です。 以前細胞の継代について質問させて頂き、お陰様でようやくパスは安定して出来るようになりました。 現在、96wellプレートを用いたグロースのカウント（培養）が上手く出来ず大変困っています。 癌細胞（浮遊、接着）を細胞培養専用のフラスコを使って培養しています。 継代の際は、細胞液をチューブに移して遠心にかけ、上清を吸って培養液（RPMI)を入れ数個のフラスコに分けます。 その際、その細胞液をさらに培養液で希釈し2×10＾4cell/mLで100μLずつ96wellプレートに播種し、毎日グロースを算定板を用いてカウントします。 3回くらい播種しましたが、毎回細胞が思うように増えず、恥ずかしながら多くても本来のピークの1/10程度です・・・ フラスコに継代した細胞は順調に育ち、播種後のプレートを顕微鏡で覗いた時は大体均等に細胞が確認出来るのですが、その後培養液の色はほとんど変わらず・・ プレートは一日UVに当てる、マイクロピペットでのピペッティングを十分に行うなど自分なりに気をつけているのですが、何度も失敗しているので播種する時の操作が悪いと考えてます。 同級生も皆同じ方法で播種し、カウントしているのですが結果は結構ばらついていて、自分のようにピークが極端に少ない人もいるようです。また、一番上手くいっている人でもピークは昨年の先輩のデータの半分程でした。 初めは1×10＾4cell/mLで播種しましたが、育ちが悪いので2×10＾4cell/mLに変更しました。 しかし結果はほとんど変わらず、死細胞が極端に多くなります。 細胞播種の操作で、気をつけるべき事やここで失敗しやすいなど、アドバイスがあれば教えて頂きたいです。 また、プレート内の接着細胞をはがす際、どのくらいの間EDTAに浸ければ良いのかも知りたいです。何度もピペッティングすれば大丈夫なのでしょうか？ あまり長い間EDTAを入れていたら細胞が死んでしまう様なので… 質問が多くて申し訳ございませんが… 安定して良い結果を出せるように頑張りたいので、よろしければアドバイスをお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- 摺動面潤滑油と切削油の相性について
皆様 いつも大変お世話になっております。 首題の件についてＮｏ１９５８７の質問を発見し私も調査してみたいと考えているのですが、切削油を使用濃度まで希釈して調査するのか原液のままで行うのか分かりません。 一年前の質問であり、その質問に投げかけても回答が帰ってくるか心配でしたので、新しい質問としました。宜しくお願い致します。 No19587より抜粋させて頂きました。。。 「切削油と潤滑油を１００ｍｌくらいずつ入れたペットボトルをシェイクして観察すると分離性が良くわかります。１回目は割ときれいに分離するのですが、回数を重ねると分離性が悪くなってきます。この辺で相性の見極めが可能です。 また、切削油の中には洗浄作用があるものがあり、潤滑油をきれいに洗い落としてしまう物もあります。きれいに分離するのであれば、この辺も大丈夫と言うことになります。」
- ベストアンサー
- マシニングセンター
- ヒト末梢血単核球の播種条件
どなたか助けて下さい。 困っています。ヒト末梢血単核球を用いて研究しています。 ＩＬ－１ｂで刺激後の細胞内タンパクの変化をウエスタンブロッティング法 にて検討したいのですが、うまくいきません。 分離はロイコプロールを用いて遠心分離しています。 細胞数をカウントすると細胞はとれているようなのですが、 50ml の血液からとった細胞を 6well dish に１×１０の７乗ぐらいで細胞を播いてタンパクの回収を行っうとたんぱく量がほとんどとれません。他の細胞では問題ないので、培養や播種条件に問題があると考えています。ヒト末梢血単核球をウエスタンブロットで解析するうえでの培養条件や播種条件のプロトコールを教えていただけないでしょうか？よろしくお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- 細胞数の計算
ラットの脾臓を無菌的に取り出し、ＦＣＳを含むＲＰＭI1640培地で細胞浮遊液を5mL調整した。 この中の生細胞濃度を知るために、細胞浮遊液1mLをとり、遠心分離機後上清を捨て、400μＬのＰＢＳで細胞を懸濁した。そこから、50μＬとり、同量のトレパンブルー液と混合し、Thoma型血球計算盤の中区画（縦0.2mm,横0.2mm,高さ0.1mm）を観察すると生細胞（ａ）個存在したことから、元の細胞浮遊液中の生細胞数を1×10＾7個/mLであることが分かった。（a）を求めよ。 先輩の答え） 中区画の容積は、0.2*0.2*0.1=4.0*10^(-6)cm^3 中区画1区画あたりの平均の細胞数がＮ個の場合、元の細胞数は Ｎ/4.0*10^(-6)×100/50×400/1000[個/mＬ]と表せるので、 （a）/4.0*10^(-6)×100/50×400/1000=1×10＾7 よって、(a)=50 となっているのですが、なぜ「中区画1区画あたりの平均の細胞数がＮ個の場合、元の細胞数は Ｎ/4.0*10^(-6)×100/50×400/1000[個/mＬ]と表せる」のでしょうか。 とくに、100/50や400/1000は何を表しているのでしょうか。 お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学