トランスフェクションでの培地について

質問

学生で実験初心者です。
HEK293細胞へのトランスフェクションの際、opti-memまたは血清なしのDMEMを使用すると卒業生のプロトコールノートに記載してありました。

今まで、opti-mem＝血清の入っていない培地でトランスフェクションで使用、DMEM＝血清入り培地で細胞の培養時に使用、という風に思い使用していたため、混乱してしまいました。

opti-memとDMEMの違いは何なのでしょうか？

また、opti-memと血清なしDMEMで導入効率に差が生じる原因についてもご存じでしたら、こちらの方もご回答よろしくお願いします。

回答No.1

warudori · ベストアンサー

opti-menはインビトロジェン社（現：ライフテクノロジーズ社）から販売されている
インビトロジェン社の形質転換試薬（リポフェクタミンなど）に最適された培地です。

血清なしの培地です。

リポフェクタミンと核酸の複合体を形成させるときに、様々な成分が邪魔をするらしく（イオン的な要因だとか・・・）、
opti-menは邪魔をする成分を極力除去した培地だと思ってください。

一応、核酸とリポフェクタミンの複合体の形成はopti-menを使うのが原則（血清も抗生剤も入れない）

複合体の形成をopti-menで行えば、あとはDMEM血清含有で良いみたいです。
昔は細胞もopti-men血清なしで形質転換して、８時間御くらいに血清含有DMEMに培地交換することもありましたが
リポフェクタミン2000以降に開発された試薬は簡略化していいという声を聞きます。

先輩のプロトコールで問題がないのでしたら、それに従ってください。
あとは試薬のマニュアルをよく読んでください。

お礼

詳しい回答ありがとうございます。もう一度試薬のマニュアルを読み実験したいと思います。

回答No.2

hiddenleaf

経験則的な話しで申し訳ありませんが、opti-memでも無血清DMEMでもあんまり変わりません。
同社から販売しているLipofectamineを使用する際には、コレを使ってね。
と、メーカーから推奨されているってだけですよ。

お礼

回答ありがとうございます。私も血清なしDMEMとOpti-memで条件検討して使用する培地を決めようと思います。