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96wellプレートかたの細胞のはがし方について

基本的な質問で申し訳ありません。 現在、96wellプレートでHeLa細胞の増殖曲線を描こうとしています 最初の1,2日目は比較的きれいにはがれるのですが、その後日を経るにつれてはがれが悪くなってしまい、きれいにはがすことが出来ず、正確な数が測定出来ない状態です。 プロトコールとしては、培地を除去した後に、20μlの0.05%トリプシンを処理後、37℃で3分間インキュベートし、その後80μlの培地を入れてピペッティングを行うことではがしています。(ちなみに20μlではwell全体にいきわたっておらずそれも原因の一つかと考えております。) もともとトータルの液量もあまり多くないため、全体をはがそうとして、ピペッティングの回数を増やしますと、泡だってしまうのでそれもどうにか避けたい状況です。 96wellプレートで、細胞の良いはがし方がありましたら教えていただけると光栄です。宜しくお願いいたします。

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  • ga111
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回答No.1

>培地を除去した後に、20μlの0.05%トリプシンを処理後、37℃で3分間インキュベートし、 PBSで1度、もしくは2度洗ってみてください。インキュベートは10分くらいでもいいです。いずれにせよ、顕微鏡下で、完全にはがれていることを確認します。 >その後80μlの培地を入れてピペッティングを行うことではがしています。 PBSを代わりに入れてみてください。

blodline
質問者

お礼

回答していただきありがとうございます。 washを行った後で、PBSではがしてみたいと思います。 ありがとうございました。

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その他の回答 (1)

  • DoubtOwl
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回答No.2

>20μlではwell全体にいきわたっておらずそれも原因の一つかと考えております 一度全体にいきわたる量のトリプシンで浸したあと、取り除いて20μlのトリプシンを入れてみてください。

blodline
質問者

お礼

なるほど、全体に一度いきわたらせてから20μlで処理するということですね。 ありがとうございます。参考にさせて頂きます。

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