ベストアンサー セルカウントについて 2009/10/29 15:51 細胞のセルカウントを行う際、死んだ細胞が混ざっていてもカウントできるようなのですが、生きた細胞と死んだ細胞はどうやって区別してカウントすることができるのでしょうか？ みんなの回答 （1） 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー otx ベストアンサー率44% (256/576) 2009/10/29 16:19 回答No.1 トリパンブルーっていうものがあります。 http://www.sigma-aldrich.co.jp/cgi-bin/protocol/p_dsp.cgi?pid=124 http://www.gelifesciences.co.jp/newsletter/biodirect_mail/technical_tips/tips22.asp 質問者 お礼 2009/11/02 14:22 回答ありがとうございます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A 教えてください！血球計算盤の使い方 血球計算盤で培養細胞を数えられません！ ピントのあわせかたによって、培地に混じったゴミが 半透明にそれっぽくみえたり、もやっと大きく見えたりしますよ・・ね？ あれと細胞の区別がつかないんです・・・。 血液細胞なら大丈夫でした。 が、培養細胞だと、これゴミ？？細胞がクシャッとしたやつ？？と どうしても自信がもてません。 教えてもらったり、人が数えた結果から推測してみるのですが、 それでも自信をもってカウントできず・・・。 （ちなみに人が数えた結果とは明らかに違う数値が出ることがあります） なんで、こんなことでつまずくんだ～？？って感じです。 血球計算盤に細胞がのってる画像（視野中に何個細胞がみえてるのか書いてあるもの） ってどこかにないでしょうか～？？もし知ってましたら教えてください。 wikiはみました。（20区画に35個くらい・・でいいんですよね？） 癌細胞のコロニーカウントについて質問です。 癌細胞のコロニーカウントについて質問です。 癌細胞に放射線を当ててコロニー生成する率を調べています。放射線の量を増やすごとに植える細胞の数も増やしています。たとえば2Gyの時は4,000、4Gyの時は40,000のように。50細胞以上を含むコロニーをカウントするように決めて、2週間後のカウントにしています。 前立腺癌の細胞で分裂速度が非常に遅いタイプです。 結果として、2Gyはいいのですが、4Gyのプレートには数個ずつしか細胞を含まない小さなコロニーが数百個残っています。しかし一つのコロニーに含まれる細胞は50個以下なのでカウントは0個になります。しかしコロニーを数えるのが実験の目的なので0個では困ります。 質問ですが、この場合 4Gyのプレートに植える細胞を増やすべきなのか減らすべきなのか。あるいは3週間後のカウントにするべきなのでしょうか。 どなたか、アドバイスをよろしくお願いします。 顕微鏡下でGFPが光っている細胞をカウントしたい とてもものぐさな研究者です。 核染色の細胞数とGFPの細胞数を自動でカウントしてくれるソフトがあれば、簡単に導入率とか計算できるのに、と思うのですが、そのようなソフトはないでしょうか？ 現在は写真を撮って、日本野鳥の会のようにカチカチ、青い細胞がいくつ、緑の細胞がいくつ、とカウントしています。 血球版での細胞数の計測。均等に散らばりません。 ビルケルチュルク血球版を使って癌細胞の細胞数をカウントしているのですが、うまく細胞が均等に散らばりません。顕微鏡で見ますと、細胞が偏っている事が多々あります。 工程としましては、 細胞懸濁液10μlをカバーガラスと血球板にの間に流し込み顕微鏡で見てカウントするという方法なのですが、 何か良い解決方法は無いでしょうか。 倍ぐらい細胞数が違う区画が多々あります。 ご教授お願い致します。 bioassayについての質問 マウスのプロラクチンをNb2細胞で測っているのですが、検量線がうまく引けません。また、細胞のカウントにばらつきが出てしまいます。何かいいアドバイスがあれば教えてください。お願いします。 細胞播種（96well)のコツを教えてください。 閲覧ありがとうございます。 今年10月にバイオ系の研究室に配属されました大学３回生です。 以前細胞の継代について質問させて頂き、お陰様でようやくパスは安定して出来るようになりました。 現在、96wellプレートを用いたグロースのカウント（培養）が上手く出来ず大変困っています。 癌細胞（浮遊、接着）を細胞培養専用のフラスコを使って培養しています。 継代の際は、細胞液をチューブに移して遠心にかけ、上清を吸って培養液（RPMI)を入れ数個のフラスコに分けます。 その際、その細胞液をさらに培養液で希釈し2×10＾4cell/mLで100μLずつ96wellプレートに播種し、毎日グロースを算定板を用いてカウントします。 3回くらい播種しましたが、毎回細胞が思うように増えず、恥ずかしながら多くても本来のピークの1/10程度です・・・ フラスコに継代した細胞は順調に育ち、播種後のプレートを顕微鏡で覗いた時は大体均等に細胞が確認出来るのですが、その後培養液の色はほとんど変わらず・・ プレートは一日UVに当てる、マイクロピペットでのピペッティングを十分に行うなど自分なりに気をつけているのですが、何度も失敗しているので播種する時の操作が悪いと考えてます。 同級生も皆同じ方法で播種し、カウントしているのですが結果は結構ばらついていて、自分のようにピークが極端に少ない人もいるようです。また、一番上手くいっている人でもピークは昨年の先輩のデータの半分程でした。 初めは1×10＾4cell/mLで播種しましたが、育ちが悪いので2×10＾4cell/mLに変更しました。 しかし結果はほとんど変わらず、死細胞が極端に多くなります。 細胞播種の操作で、気をつけるべき事やここで失敗しやすいなど、アドバイスがあれば教えて頂きたいです。 また、プレート内の接着細胞をはがす際、どのくらいの間EDTAに浸ければ良いのかも知りたいです。何度もピペッティングすれば大丈夫なのでしょうか？ あまり長い間EDTAを入れていたら細胞が死んでしまう様なので… 質問が多くて申し訳ございませんが… 安定して良い結果を出せるように頑張りたいので、よろしければアドバイスをお願いします。 特定の人の細胞だけ取り出せますか たとえば、複数の人の唾液が混ざった試料があるとして、 そこから特定の人の細胞だけ取り出すことは可能でしょうか？ そもそも自分の細胞と他人の細胞を区別することはできるのでしょうか？ もしできるのでしたら、その方法などについて教えてください。 細胞のことに関しては素人です。 暗順応したヒトの光源の色認識について ヒトの視細胞についての質問です。 暗いところでは桿体細胞が働いて色の区別がつかない一方で、明るいところでは錐体細胞が働き色が識別できるといいます。 ところが暗い部屋で、赤LEDランプが点灯している場合、暗順応したヒトでも赤い光を認識することが出来ます。 これは暗順応しても部分的には錐体細胞が機能しているから赤色を認識できると考えればいいのでしょうか？ 減光フィルターを赤色LEDに被せて桿体細胞で捉えられるぎりぎりの輝度まで抑えた場合だと、暗順応したヒトは、光っているかどうかの区別が付くだけで、色の区別はつかないのでしょうか？ レクチン（SBA) 免疫学でよく使われるレクチンでSBAというのがありますが、これは脾細胞のB細胞とT細胞を区別するのに使われるそうです。多分、SBAはB細胞に結合し、T細胞には結合しないと考えたのですが、それはなぜですか？ 多検体の細胞数を効率的に測定するには 血球計算盤ではとてもやりきれそうにありませんが、80サンプル程の細胞の増殖の様子を見るために細胞数を連日カウントするとしたら、どのような方法が一番効率が良いのでしょうか？ エクセルで、文字列の合計表示をするには（その２） 文字列数をカウントする方法は伺ったのですが、文字列自体を区別してカウントする方法はあるのでしょうか。たとえば「田中」と「田中（田中に下線を引いて区別するなどした場合）」の合計は２で、うち下線を引いた田中は１などという方法です。 何度も質問してすみません。 神経組織についてなんですが、 有髄神経には中心から軸索、髄鞘、シュワン細胞とあり、無髄神経では軸索、シュワン細胞となっていますが、髄鞘というのは結局シュワン細胞の細胞質なんですか？ 髄鞘とシュワン細胞はつながっていて一つの細胞体ということなんでしょうか。しかしそれを機能的？構造的？に区別してべつべつに呼び分けているだけなんでしょうか？ ややこしいですが、よろしくお願いいたします 血球計算盤について 血球計算盤がほしいなあと思って調べてますが、 いろいろ種類があって、どれがいいのやらわかりません。 用途は細胞数カウントするだけで、簡単に、かつ正確に測定できれば 文句はありません。 改良ノイバウェル？ビルケルチュルク？トーマとありますが、 どれが比較的使いやすいのでしょうか？ あと、JIS、JHS検定品とありますが、どちらが細胞数の カウントにふさわしいのでしょうか？ できれば低コストの物がいいですが、何万かかかるのは 仕方ないと思っています。 みなさんはどのようなタイプの血球計算盤を使っている のでしょうか？ 細胞培養（継代）について教えて下さい。 細胞培養（継代）について教えて下さい。 細胞数のカウントの仕方がわかりません。 ”わかりやすく”教えていただけるとうれしいです！ 例えば・・ 元の培地の細胞数・・25×10・4/ml だとします。 これを”1×10・5/ml”になるように蒔くためには 10mlの培地に何μlを蒔けば良いのでしょうか。 お恥ずかしいことに、この何乗というのが苦手で（涙） 考えていたらどんどんややこしくなってきてしまいました。 初歩的なことですみません、宜しくお願いします！ 細胞培養のトリプシンEDTAの毒性 細胞を剥がすときトリプシンEDTAを使っています。 細胞を剥がしてから細胞数をカウントする工程が多々あるのですが、細胞数を計測している時間(10～多い時で30分)は細胞はトリプシンEDTAに浸かった状態のままになります。 トリプシンEDTAは細胞にとって毒性があると思いますが、何分ぐらいなら細胞をトリプシンEDTAにつけていても大丈夫なのでしょうか。 また細胞を剥がして、少しの間放置しなければならない場合、細胞に負担がかからない何か良い方法はあるのでしょうか。 ご教授お願い致します。 トリパンブルーと細胞生存率 トリパンブルー染色で細胞数をカウントし、その生存率を算出しています。 今回、しっかり張り付く細胞に薬剤を添加して、見た目はほぼすべての細胞が浮き上がり死細胞のように見えたので同じようにトリパンブルー染色をしたのですが、半分くらいは染まりませんでした。 これは、もちろん薬剤の影響で弱っていても約50%は生細胞であると考えるのでしょうが、 もしかして細胞株によってはトリパンブルーが入りにくいということもあるのでしょうか。 エクセル 特定の文字のみカウント １列目が「〇」の時の、その行の「a1」だけカウントするにはどうすればよいのでしょうか？ R2C6に =COUNTIF(RC[-4]:RC[-1],"a1") と入力すると「Ａ１」と「a1」をカウントしてしまい「２」になってしまいます。 「Ａ１」と「a1」を区別できるようにカウントさせたいです。 よろしくお願いします。 【顔細胞】の事を教えて下さい！ 人間には顔細胞っていうのがあって、それで人を区別しているっていうテレビを見たことがあります。 それってどういうことなのですか？？ 詳しく教えてほしいのと、サイトがあったら教えてください。 Excel DSUM DCOUNTA関数の使い方 こんにちは。 Excel2003でDSUM DCOUNTA関数を使用しています。 ある範囲の中から文字列が何個あるか計算します。 この関数の場合たとえば shouhin2000とshouhin3000は別物としてカウントされるので問題はありません。 しかし shouhin2000とshouhin2000+は区別されずにまとめて何個あるかカウントされてしまいます。 この場合区別してshouhin2000とshouhin2000+を別々にカウントする方法はありますか？ また上記の逆で shouhin2000とshouhin3000をまとめて何個あるかカウントする方法はありますか？ 特にDSUM DCOUNTA関数にこだわっていませんが前任者が作ったファイルを 改造しているためでてきた問題です。 ご存じの方お教えください。 よろしくお願いいたします。 細胞数の経時的な数え方 かなり初心者です。 ある細胞に薬剤を添加して増殖抑制がかかるかどうかを、経時的に追いかけています。 未処理のコントロールに対する生存率だけでなく、細胞の絶対数の経時的な変化も知りたいので、96ウェルプレートに撒いて2日おきにMTTアッセイを行なっています。 しかし、この方法ですと毎回細胞数をヘモサイトメーターで測って、標準曲線を立てる必要がありますが、このヘモサイトメーターで細胞数を数えるところが結構アバウトで、検量線が毎回ずれているような気がして仕方がありません。こういう実験をする時は、他の方法で細胞数をカウントする方が良いのでしょうか？何か良い方法はありますか？ヘモサイトメーターで数を数えるのは、慣れればかなり正確に出来るものなんでしょうか？ 何分数が多いので、なるべく簡便な方法でカウントしたいと思っています。 よろしくお願いいたします。
お礼
回答ありがとうございます。