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抗イヌIgG抗体の分子量
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お世話になります。 10月にうけた健康診断で若干の肝機能異常があったため、度々こちらで質問しているものです。 （http://okwave.jp/qa/q8831125.html） （http://okwave.jp/qa/q8847796.html） 12月の検査でてっきり主治医から免罪符をもらったと思っていましたが、実は消化器内科の専門医にまわされていた、というオチでした。。 新しくかかった消化器内科でまたいくつか検査を指示され、先日うけた血液検査の結果が本日わかりました。（患者用ポータルサイトからオンラインで自分の結果にアクセス可） ※左から健診時⇒先週のもの AST（基準値14～41）: 62 ⇒ 46 ⇒ 58 ⇒ 54 ALT（基準値14～54）：96 ⇒ 76 ⇒ 89 ⇒ 97 ALP（基準値 ～ ）：73 ⇒ 80 ⇒ 84 ⇒ 83 今回あらたに行ったのが自己免疫抗体等です。 抗核抗体 ：陰性 抗平滑筋抗体：陽性（1:40） IgGやγGtpは未検査です。（たぶん） セリアック病のスクリーニング検査もされていますが結果はまだです。 来週に超音波検査をうけることになっています。 医師からのコメント欄には「未だ緩やかに炎症中」的なことのみかいてあり、抗体値については触れられていません。 抗体検査のあまりに微妙すぎる結果に悶々としています。 40倍なら「うっかり、たまたまでちゃった」ってこともありますか？ 10年ほど前に「うっかりでちゃった 橋本抗体(TgAb)」のためにいまだ煩わしい思いをしているので・・（びまん性甲状腺肥大、ホルモン値は正常、その後TgAb抗体も消失） 自己免疫性肝炎 以外で、抗平滑筋抗体がちびっと陽性になるのはどのような場合がありますか？ 自分自身では脂肪肝だろうと思っていたのですが・・。家庭医からも専門医からも具体的に疑わしい病名等はいっさい言われていません。 次の専門医の予約は3月です。海外在住で言葉の壁もあるので事前に情報収集をしています。
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私は大学院生をしており，微生物の遺伝子について研究を行っています． しかし，最近は実験をしても，期待するような成果が得られず実験が滞っています． その実験というのは「グラム陽性菌からのプラスミド抽出」です． 院生でありながらこのような質問をするのは非常に恥ずかしい事だとは分かっているのですが，最近は全然うまくいかず，非常に困っています． このグラム陽性菌が有する約120 kbのプラスミドを抽出したいのですが，アルカリ法で抽出した後にアガロースゲル電気泳動を行ってもバンドを確認することができません． また，この菌は複数のプラスミドを有しており，比較的サイズの小さなプラスミド（約20 kb以下）までは頻繁に確認することができます． 以下に実験手順を記入しますので，このような大きなプラスミドでも抽出できるようにするためのアドバイスをしていただきたいです． １．前培養：植菌して12～20時間振とう培養 30℃ LB液体培地 ２．本培養：前培養液から50 μLを5 mLのLB液体培地が入った試験管に添加，6～8時間30℃で培養 ３．本培養液全量を15 mL容チューブに移し，遠心分離． ４．培養液を捨て，沈殿にSolI 9mLを加えて激しく撹拌 ５．この溶液を遠心分離し，溶液を捨てる ６．沈殿に1 mLのSolIを加え，激しく撹拌 ７．16 mg/mLの濃度でリゾチームを溶かしたSolIを1 mL加えて穏やかに混合 ８．37℃で2時間30分～4時間反応させる．（30分を目安に穏やかに混合） ９．SolII 4 mLを加え，穏やかに混合，5分間室温で放置 １０．SolIII 3mLを加え，穏やかに混合，20～30分間氷上で放置 １１．この溶液を冷却遠心分離，沈殿は廃棄し，溶液のみを新たな15 mL容チューブに回収 １２．イソプロ 7 mLを加え，混合．室温で1時間放置 １３．冷却遠心分離を行い，沈殿を800 μLのTE溶液に溶かす １４．この溶液を1.5 mL容チューブに移し，フェノールクロロホルム溶液600 μLを加えて5分間混合 １５．遠心分離を行い，上層の溶液を新たなチューブに回収（タンパク質の層を回収しないように注意） １６．14～15の操作をもう一度行う． １７．回収した溶液にイソアミルアルコール/クロロホルム溶液600 μLを加え混合 １８．遠心分離をおこない，上層の溶液を新たな1.5 mLチューブに回収 １９．この溶液に3M 酢酸ナトリウム溶液を添加（回収した溶液の1/10量の酢酸ナトリウム溶液） ２０．この溶液と等量のイソプロを加え，室温で2時間放置 ２１．遠心分離を行い，溶液を捨て，沈殿に70%エタノールを加え遠心分離 ２２．溶液を捨て，5分程この沈殿物を乾燥させる ２３．沈殿をTEに溶解させ，サンプル完成 （この時RNAも除去しています） このような実験手順なのですが，何かアドバイス，不備な点などがあったら教えてください．宜しくお願いします（キットを使うというのは無しで・・・）． PS．この大きなプラスミドは今まで抽出できたことがないわけではなく，この一年ほどで回収できる頻度が著しく低下しているという状況です．作り置きしておいた試薬を作りなおしているのですが，なかなかうまくいきません．失敗したときのアガロース電気泳動写真も添付しておきます．
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お礼
なるほど。 早々のご返答、ありがとうございました。