- ベストアンサー
EGFP消失はなぜ?
tatooの回答
- tatoo
- ベストアンサー率53% (38/71)
器官培養系で行っていることなので、細胞株の系みたいに簡単にはいかない実験系であることをお察しします。 実際に見てもいないところで、とやかく言うのはいかがなものかと思いながら書かせてもらいますが、 「遺伝子を叩いたことによる変化」という大きく、かついかんともしがたい原因以外で残っている可能性は少ないですが、思いつくことと言ったら次のことです。 shRNAがEGFPをもRNAiを起こしている。 ありえるでしょうかね・・・。ただ、shRNAの配列によってはありえるかもしれません(汗。別の配列のshRNAを作成し、既存のshRNAとともに実験してみるということも手かもしれません。 もしそれを行ってみても同じようなEGFPの減少が見られるのならば、このことはやはり遺伝子を叩いたことによって起こる、しょうがないことであるということがむしろはっきりするので、その意味でもいいかもしれません。EGFPの減少がみられなくなればラッキーですしね。
関連するQ&A
- 組換え遺伝子
組換え遺伝子って、目的のタンパク質をコードする遺伝子に、プロモータやエンハンサーをくっつけてるんですよね? で、その種類なんですけど、アデノウイルス由来とか、サイトメガロウイルス由来とか、いろいろありますよね? 種類によってどんな働きをするのでしょうか? 遺伝子にはほとんんど無知なのですが、使わなくてはいけなくなりました。 ヒトCMV-IEプロモーター/エンハンサー下流に変異させたGFPをコードするシークエンスを配置したプラスミドで、GFPの上流にあるNhe(1)サイトでのみGFPとの融合タンパク質ができます。動物細胞中でのGFP高発現に用いられます。 ↑こんな説明を理解するためには、どう勉強したら良いのでしょうか? 参考書の紹介でも構いません。 ご教授下さい!
- ベストアンサー
- 生物学
- 遺伝子発現でのプロモーターについて
GFPと他の興味ある遺伝子を1つのプラスミドやウイルスで共発現させようと考えています(ク○ーンテック社で出てるのは知ってます)。その場合、SV40とCMVの2種類使ったほうがいいのでしょうか?たとえば、1種類のみで、SV40をそれぞれにつけた場合はあんまりよくない気がしているのですが、どうなのでしょうか?また、こういったプロモーターと遺伝子発現に関する実用的な書籍、Web Site(国内外ともに)を紹介していただけたらと思います。できたら組織特異的な(脳、心筋や骨格筋など)プロモーターに関しても知りたいのですが。かなり未熟ですが、よろしくお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- マクロファージに関する分化誘導マーカー
THP-1細胞をPMAを使ってマクロファージへ分化誘導する際に発現する分化マーカーについて、どのような物があるか教えて下さい。 また、参考にできるサイトがあれば教えて下さい。よろしくお願いします
- 締切済み
- 生物学
- 繊維芽細胞の分化誘導について教えてください
繊維芽細胞の分化誘導について教えてください マウス皮膚から分離した繊維芽細胞を筋繊維芽細胞へ分化させる系で実験を行いたいと思っています. 論文などでは培地へTGF-bを添加することにより筋繊維芽細胞分化マーカーとなるaSMAの発現が上昇することが報告されていますが,私の場合10%FCSを添加したDMEMで培養するだけでaSMAが高発現しています. 培養条件などどのようにすればTGF-bに応答する系がつくれるでしょうか.ご回答よろしくお願い致します.
- 締切済み
- 生物学
- 受精卵から個体になるまでのプロセス
受精卵が発生して動物体になっていくプロセスを細胞の分裂、分化、遺伝子の発現調節をキーワードに説明する という問題が参考書の末に書いてありました。 僕が資料を見て作成した文章が 多細胞生物は細胞の分裂によって数を増やすことで発生を進めていく。細胞が分裂し増えていく際に、エピジェネティックな修飾により、遺伝子の発現が調節され、同一の機能からそれぞれ異なった機能を持つようになる。たとえばヒトの細胞のミトコンドリアの遺伝子は全て母親由来である。 そのように発生が進む中で細胞ごとに機能を有するようになると神経を形成する細胞、骨を形成する細胞などが集まり組織を形成するようになりその機能に特化するために細胞が分化していくことで個体が形成される と書いてみたものの自信がありません。 もう少し簡略に説明するにはどうしたらいいでしょうか。またそもそも間違った表現をしているならばご指摘を頂きたく存じます。 ご面倒おかけいたしますがよろしくお願い申し上げます。
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
また回答していただきありがとうございます。 細胞株であれば、様々な困難を乗り切れそうな気がするのですが 苦労の連続です…泣 EGFPもRNAiを起こしている可能性があるとは全く考えていませんでした! shRNAのコントラストは幸い3つあるので他のを引っ張り出してきて調べてみようと思います。 tatooさんやga111さんのような専門家に答えていただき感激です。 本当にありがとうございました。