• 締切済み

SDS-PAGEによる選択曲線。

noname#53364の回答

noname#53364
noname#53364
回答No.1

軸はちゃんと対数をとっいていますか？ 対数でなければ、おっしゃるような形になります。 また、グラフがねてくる値は、分画可能な範囲ですか？ 直線性がある＝定量性があると言うことです。 その意味をもう一度よく考えればおわかりになると思います。 例えば分光光度計で、吸光度の直線性が落ちてくるような 値ではかると言うことはよいのでしょうか？ 定量性と言う意味では同じですよね。

この回答がついた質問に戻る
回答 全件
ゲルの濃度と分画可能な分子量の関係は確認されましたか？
  1. カテゴリ
  2. 学問・教育
  3. 自然科学
  4. 化学

関連するQ&A

  • SDS-PAGEについて

    大学の実験でやったSDS-PAGEのレポートを書くんですが、タンパク質の分子量と泳動度を使いグラフを作る課題があるんですが、ｋDというのが分子量だとは思うのですが泳動度をどのように求めたら良いのかがわかりません。参考書に比移動度というのがあり、分子量の対数に逆比例する。と書かれているものがあったのですが、これと泳動度は同じものなのでしょうか？この実験には分子量マーカーと成分のわからないタンパクを使ったのですが、マーカーを使いグラフを書くんでしょうか？生物系はまったく判らないのでよろしくお願いします。

  • 分子量測定時の校正曲線の近似式

    ゲル濾過法(GFC)にて、植物由来の多糖の分子量を測定しています． スタンダードにShodexのプルラン（MW22800、112000、212000、404000の四種） を用い、分子量とRTをプロットして校正曲線を作成しているんですが（片対数）、 Excelで近似曲線を選ぶ場合、線形が良いのか、累乗がいいのか、はたまた他の ものがよいのかいまいちピンと来ません．R^2値は線形が0.9915、累乗が0.9991です． 単純にR^2が1に近い累乗近似の方を校正曲線として選べば良いのでしょうか？ 近似式の採用いかんによっては結構分子量が違ってくるのでちょっと気になります．

  • SDS-PAGEについて

    タンパク電気泳動の際、SDSを加えることにより、もともとの電荷（プラスやらマイナスやらタンパク独自が保有していた電荷）をマイナスに帯電させますよね。そして電流を流し、アクリルアミドゲル中で分子ふるいにかけ分子量ごとに分離させるんですよね。 そこで質問ですが、タンパクの分子量に関わらず結合するSDS量というのは一定なのでしょうか。 現在就職活動中で先日技術面接時に、「タンパクの分子量によって結合するSDSの量も変わるの？」って聞かれて「はい」って答えたら、「違う量のSDS結合したらそれだけで流れ方変わってくるでしょうが。同じ量のSDSが結合して、そして分子ふるいにかけるんだよ」って叱られました（笑） 自分で調べたうちではタンパク１ｇに対しSDS１.４ｇが結合するという記載もあったので、タンパク分子量によりSDS結合量も違うと思うのですが。 SDS結合量依存的に流れ方は変わるのでしょうか。どうなのでしょうか、ぜひとも意見をお聞かせください。

  • SDS

    SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動よって撮影されたものから、方対数をつくるんっですが、横軸にバンドの距離、縦軸に分子量（DA)をとり分子量マーカーの各バンドの値をプロットするんでづけど、やりかたがわからなくて作製できません・・（DA)は図の分子量を参考にせよとかいてあるんですが

  • SDS-PAGE 移動度について

    こんにちは！！ 大変初歩的な質問で申し訳ないのですが、ご回答お願いいたします。 大学でタンパク質の精製実験をし、チトクロムCの純度が上がっていくのを確認するためにSDS-PAGEをおこないました。 SDS-PAGEでは、マーカーのRf値と分子量の対数値をプロットしたグラフを作成し、そこから分子量未知の試料の分子量を求めるということは理解しています。 Rf値は、ブロモフェノールブルーの移動度を1とした各試料の相対移動度であるということですが、ブロモフェノールブルーの移動度はどこからわかるのでしょうか。 SDS-PAGEの結果のカラーコピーがあるのですが、これをものさしで測ってやればいいのでしょうか？(>_<) ご回答お願いします。 あと、試料は、タンパク質精製のいろいろな段階からとったもので3種類あります。これらの試料から、チトクロムCの純度を求めるのですが、これはSDS-PAGEで染色されたすべての部分の総分子量(1)とチトクロムCの分子量(2)をもちいて、 (2)/(1)で求めればいいのでしょうか？ いろいろな文献を読んでもわかりませんでした。 大変初歩的で申し訳ないですが、ご返答よろしくお願いします。

  • SDS－PAGEの分子量

    SDS－PAGEであるたんぱく質の断片を泳動したのですが、分子量は小さいはずなのに、それより分子量が大きいものよりも上のほうにバンドが検出されました。 私なりに考えた結果酸性アミノ酸（Asp,Glu)が多く含まれているので流れにくかったと考えたのですが、そのほかに考えられる理由はあるのでしょうか？ pIが大きく違うのですが、これは関係あるのでしょうか？

  • SDS-PAGEのマーカー

    SDSーPAGEの分子量マーカーが曲がって出てきてしまうのですが、原因は何が考えられますか？？ この分子量マーカーは、Amershamというところの「LMW　Calibration Kit　For SDS　Electrophoresis」というものを使用しています。 ゲルは１２．５％のもので、電圧は２０Aで電気泳動を行ってます。

  • SDS-PAGEゲルのトラブル

    あるタンパク質を生体物質から私の研究室（かなり小規模な研究室なので聞ける人があまりいないのです。）では精製していて、随分以前からそのタンパク質が精製できているかどうかをSDS-PAGEゲル上で確認していました。 ところが、ここ1ヶ月ほど前からそのSDSーPAGEゲルの電気泳動結果がおかしいのです。。 例えば、 *本来あるはずの低分子タンパク質のバンドが薄くしか（もしくは全く）見えない。高分子領域にスメアがたくさん見える。 *本来サンプルがアプライされているはずのないレーンにスメアっぽいバンドがたくさん見える。（特に高分子領域に） *バンドはかなりスメアっぽく見える。（シャープなバンドではない。） あと気づいたことですが、泳動直後のゲルはかなり暖かくなっていました。 このような原因として何が考えられるでしょうか？本当に困っています。 ちなみに、私たちの研究室では、 *SDS-PAGEゲルは自作 ポリアクリルアミド、SDS等を水溶液にしたものが冷蔵庫にストックされていて（2.3ヶ月前に作られました）、その水溶液と常時調製している10％APS溶液そしてTEMDを混ぜ合わせて常に作っています。 *ローディングバッファー 半年ちょっと前に作られて冷蔵庫にストックされたものを使っています。 *泳動用バッファー 10倍のTrisベースのバッファーが常温でストックされているので、それを随時希釈して使っています。 *泳動条件 150V（電気泳動ユニットに異常は見られません。）

  • SDS-PAGEでのミス

    　初学者です。 　 　ゲル板をセットした状態で 　ゲル穴にマーカー、サンプルをアプライしました。 　それから泳動バッファを注いだのですが 　電気泳動したあと染色してみると 　明らかに隣のゲルにマーカーが入ってるバンドでした。 　せっかくのサンプルは全く見えません。 　３件となりまで影響がありました。 　また、アプライは1０μl加えましたが 　そのとき、すっと液がしたへ行った手ごたえが少なかったです。 　また、100ngのタンパク量がサンプル中に入るように計算して 　銀染色を行いましたが、きっちり見えたのは６つのうち１つだけ 　でした。 　 　これは希釈がへたということなのでしょうか？？ 　具体的に皆様などうされているかお教えください。

  • 片対数グラフが曲線？

    ある実験で出た結果を片対数グラフ用紙にプロットしたところ明らかに曲線を描いてしまいました。 しかし片対数グラフの特徴を考えるとプロットは直線を描くのではないかと思います。 また実験中にわざわざ「グラフは片対数用紙に書くこと」と言われたことからも、 直線にならなければ片対数グラフが指定された意味がないように思えます。 実験結果のプロット通り曲線を描いてしまうか、曲線に見えるプロットの平均をとって強引に直線を描くかで迷っています。 どちらが良いでしょうか。教えて下さい。 また同じ事ですが、片対数グラフを用いる場合曲線になることがあるのでしょうか。 よろしくお願いします。

注目のQ&A

カテゴリ

専門家に質問してみよう

職業から探して質問する
質問する