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SDS-PAGEのマーカー

SDSーPAGEの分子量マーカーが曲がって出てきてしまうのですが、原因は何が考えられますか？？ この分子量マーカーは、Amershamというところの「LMW　Calibration Kit　For SDS　Electrophoresis」というものを使用しています。 ゲルは１２．５％のもので、電圧は２０Aで電気泳動を行ってます。

質問者が選んだベストアンサー

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  • MK-GFP
  • ベストアンサー率100% (1/1)
回答No.2

(1)電気泳動の前に、プレランをしてみてはどうでしょうか？ （40mAで15分とか？？） アクリルアミドの重合開始剤に使っている、 ペル（ペルオキシ硫酸アンモニウム）が 過剰に残っていると、泳動妨害される。 と言うのを聞いたことがあります。 私は元々やってなくて、隣の研究室がやっていたので、一度やってみてあまり変わらなかったのでそれっきりやめましたが。どうにもならないなら、一度やってみる価値があるかも!! (2)LowerゲルとかUpeerゲルは古くないですか? 組成が変わったり、ｐHが変わったりしてません? なんか、古くなるとバンドがぼやけました。。 気になるようなら作り変えてはどうですか？ (3)ペルの量が多すぎて固める時間が早すぎるとか?? あたしは12.5%アクリルアミドゲル9mlに対して 10%ペル液を100μl（冬場は心持多め）で30分ぐらいで固めてました。 ちなみにSDS-PAGEの装置はATTOさんを 使われているのでしょうか? どこのにしても、SDS-PAGEをするなら 下記のATTOさんの「実験のコツ」のページが とっても親切でためになりますよ☆ 少しはお役に立てたでしょうか? 私もたんぱく質では苦労しました。。。 あきらめずいろいろ試してください!!

参考URL：
http://www.atto.co.jp/
chitinasev
質問者

お礼

返事遅くなってすいません。 ATTOのホームページはすごい参考になりました！ ありがとうございました。

その他の回答 (2)

回答No.3

泳動条件は、一定電流で20mA/ゲル枚ですか？この電流値だと多分 大丈夫だと思いますが、泳動時に温度が過剰にあがっているということ はないですか？一番の原因はおそらくサンプルのタンパク質濃度等が 濃いためだと思われます。もしマーカーの隣のレーン(サンプルをロードしているのとは違う側)が空いているのであれば、要らないサンプルを流してみてはいかがでしょう？

chitinasev
質問者

お礼

返事遅くなって申し訳ございません。 回答ありがとうございます。 電流は一定なはずなのですが。。。

  • AUGQX-MAN
  • ベストアンサー率28% (39/139)
回答No.1

マーカー以外のサンプルの電気泳動はきちんと 歪まずでているのでしょうか？ サンプルの泳動結果も同じように歪んで出てくる のでしたら、色々原因が考えられるのですが マーカーだけが曲がって出ているという事は、 ”スマイリング”という現象が出ているのでは？ と推測されます。 原因は ○電場が一定でない（電極など泳動キットを改善する） ○泳動中のゲルの温度が一定でない（ゲルを冷やす） ○一緒に泳動しているタンパク質サンプルが塩濃度 　が高い。（サンプルの作成は出来る限り塩を混ぜな 　い・脱塩などを行う） ○マーカーやサンプルをゲル板に偏って注入している 　（出来る限り中央に集中して注入） これで何とかなると思います。

chitinasev
質問者

お礼

返事遅くなってしまい申し訳ございません。回答ありがとうございました。 サンプルはキチンと出ているので、マーカーだけの問題かと思われます。 ここでおっしゃられてるゲルを冷やすというのは具体的には、どういう作業を行ったらいいのでしょうか？

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