Perkin Elmer社 Envion Excite multi label plate reader

質問

こんにちは。
また、皆様のお力を拝借致したく、質問をさせて頂きます。
これは私の知り合いからの質問なのですが、
ある研究者様がタイトルにも表記をさせて頂いておりますEnVisionをお持ちの様なのですが、マルチラベル検出用のプレートリーダーとの事です。

詳細は下記URLをご覧頂ければ、と思います。

http://www.perkinelmer.co.jp/products_ls/reader/reader_0020.html

原理は二つのディテクターを持ち、さらにそれらを同時に蛍光波長を測定するという事らしいのですが、イマイチしっくり来ません。
その理由として
双方のラベルがFRETの様な状態であるときに二種類の蛍光物質をどの様に測定する事ができるのか、
また、
ディテクターであるフォトダイオードの検出範囲が230-950nm、及びオプションのフォトマルが230-850nmとなっており、これではノンスペも拾ってきてしまう様な気がするのですが、そのならないようにフィルターを付ける事は可能なのでしょうか。フォトマルはゥミネッセンスの時のみ使用すると思っておりましたので意外でした。PMTも蛍光を拾えるのでしょうか。
サチュレーションを起こしそうで少々不安です...

以上、理解のし難い質問になってしまいますが、一つでもお分かりでしたらどうぞご教授いただけますよう、お願い申し上げます。

回答No.1

sh6364 · ベストアンサー

こちらの方面は専門ではありませんので的外れであったら無視してください。

原理は二つのディテクターを持ち、さらにそれらを同時に蛍光波長を測定するという事らしいのですが、イマイチしっくり来ません。
その理由として双方のラベルがFRETの様な状態であるときに二種類の蛍光物質をどの様に測定する事ができるのか、

2つの検出器を使用するときは二種類の物質を同時に測定する場合と同時計数を行うことによってノイズを減らすということが考えられますが、この場合は前者のようですね。フィルターを複数装着できるようですからこれでカットするのかもしれません。

ディテクターであるフォトダイオードの検出範囲が230-950nm、及びオプションのフォトマルが230-850nmとなっており、これではノンスペも
拾ってきてしまう様な気がするのですが、そのならないようにフィルターを付ける事は可能なのでしょうか。フォトマルはゥミネッセンスの時のみ使用すると思っておりましたので意外でした。PMTも蛍光を拾えるのでしょうか。

フォトマルは基本的に光を検出するものですからルミネッセンスでも蛍光でもシンチレーション光でも何でも検出可能です。波長が検出範囲内であることは必要ですが。

サチュレーションを起こしそうで少々不安です...

サチルのは量の問題ですから何を測定しても可能性はあります。そうならないよう工夫して測定するのが腕だと思います。測定対象を明確にした上でメーカーに問い合わせれば回答が得られるはずです。

お礼

お礼を申し上げるのが遅くなり、申しわけございません。
ご回答者様のコメントをじっくりと拝見させて頂きましたが、それを理解するまでに時間がかかりました。

今回はEm:630nmと、FRET対象のEx:630、Em:665nmの同時測定になります。
ダイクロもEx、Emフィルター内にインストールされている様ですのですが、お陰様でフィルターの選別も完了致しました。

PMTの件につきましても丁寧にご教授頂き、本当に有り難うございました。
何とか理解するに至りました。