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Long PCRのこつ

現在、TakaraのLA Taqを用いて、20kb位の増幅を試みています。参考書などには、30kbは余裕で増えるようなことが書いてありました。簡単に増幅するのは、10kbくらいなのでしょうか?長いフラグメントを増幅するこつがあれば、教えて頂きたいです。現段階では、増幅に成功していないのですが、腕が悪いのか、プライマーが悪いのか、酵素の限界なのか分からないので、アドバイスよろしくお願い致します。

みんなの回答

回答No.1

・長めのプライマーを使う(GC高すぎない30-35b程度) ・良質なテンプレートを用意する  (断片化させないような調製法、取扱い) ・テンプレートを多めに使う ・反応液をon iceで調製し、加熱済みのPCR装置にセットする といった辺りが一般的なこつでしょうね。 下記参考URLのページの下の方の各種プロトコールやアプリケーションに目を通してみるといいと思います。

参考URL:
http://bio.takara.co.jp/catalog/catalog_d.asp?C_ID=C0179
namimai
質問者

お礼

回答、ありがとうございました。 一応、TAKARAのトラブルシューティングを見て、やっていますが、うまくいきません。 加熱済みのPCR装置など、細かいところに気を付けながら、再度やってみます。

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