エタノール沈殿がうまくできません。

質問

PCR product をフェーノール／クロロホルム抽出とクロロホルム抽出の後にエタノール沈殿をして回収しようとしました。
PCR後に、アガロースゲルで目的DNAが増幅されているのは確認できていたのに、エタノール沈殿でDNAがでてきません。
実験の大まかな流れは、PCR→アガロースゲルでチェック→フェノール／クロロホルム抽出→クロロホルム抽出→エタノール沈殿といった感じです。
どうすればうまくエタノール沈殿ができるでしょうか。
だれか教えてください。

回答No.2

noname#17364 · ベストアンサー

こんにちは。PCRプロダクトの大きさは？各遠心の前、混合液をボルテックスでよーく混ぜてますか？フェノクロの失敗ではないですか？フェノクロの後はプロダクトがあることを確認してますか？

エタノールを2.5倍量にする
遠心前に-20℃で1hr
きっちり4℃、13000 rpm、20 min　遠心
70 % EtOHでリンスするなら、氷冷したものを用いる

という感じで普通は行けると思います。きっとちゃんと混ぜてなかったり、なんか失敗の原因があるはずです。

お礼

ありがとうございます。
教えていただいた通りにやってみたら、でてきました。

回答No.1

MIYD

塩は入れていますか？

補足

エタノールを入れる前に3MNaClをサンプルの1/10入れています。
エタノールはサンプルと塩の合計量の２倍量入れています。