PCR試薬について

質問

プレミックス溶液を使用してPCRを行っています。
同じメーカーの同じプレミックス溶液を新しく購入し、PCRをかけたところ増幅しなくなってしまいました。
再度同サンプル、同条件で同時にPCRをかけたのですが、購入前に使用していたプレミックス溶液では増幅したのに、新しいものでは増幅しませんでした。
試薬などを新しく購入した際にこのような経験をした方はいらっしゃいますか？また、どのような対処をしましたか？
現在メーカーにLot番号を送り、問い合わせをしましたが条件を変えて検討するように促されました。
新しい試薬のたびに条件を変えていたのでは、困ります。
値段も安くはないので新しいものを改めて購入するのは困難で、できれば交換してほしいのですが。。

回答No.2

am52

私自身ではないのですが、同じ研究室の人が、同じ試薬でロットを変えた場合に増幅しなくなっているのを見たことがあります。
同じ製品なのに、ここまで違うとは…と驚きました。

やはり、条件検討をやり直して対処していました。
主に、マグネシウムの濃度、アニーリングの温度、サイクル数を変えて改善していました。

メーカーの示す、トラブルシューティングなどを行って、それでも改善しない場合は、再びメーカーに問い合わせると良いと思います。

話がずれてしまいますが、私は、クローニングキットを新しいロットに変えた際に、全くコロニーが形成されなかったことがあります。
この時は、プロトコールに従い、このように操作した、トラブルシューティングもこのように行った、あと何か改善のためにできることはないか、と問い合わせた結果、キットに問題がありそうだという事で、代替品を送ってくれました。

また、別の変異導入のキットを使っていた際にうまくいかなかった時は、いくら検討しても出来ず、メーカーに問い合わせしてもうまくいきませんでした。
別のメーカーのキットに変えた所、一回でうまくいきました。

ものが違うので、何とも言えませんが、メーカーによって対応が違うなぁ、と感じました。

条件検討してメーカーに問い合わせてもうまくいかない際は、値段は高くても別のメーカーに変えるのもありだと思います。
お金も重要ですが、時間も大切ですので。

回答No.1

prumin

古い方のプレミックスが汚染されていて、本来出るべきでないシグナルが見えている可能性はありませんか？