先ほどの続きです。

質問

悩んでいる
個所は以下のところです。
手順が想像つかないもので、わかる方よろしくお願いいたします。

nutrient agar plates,seeded with 20000 plaque-forming units of phage were induced and then overlaid with IPTG-saturated nitrocellulose filters.
duplicate lift of 3hr and 5hr were washed in 50mM Tris-Hcl containing 150mM Nacl(tris-burrered saline;TBS)and then incubated tor 20 min with blocking solution(5%nonfat dry milk in TBS plus 10mM soduim azide and 0.01%thimerosal).
affinity-purified anti-calcineurin antibody that had been adsorbed with immobilized E.coil lysate was diluted into blocking solution and incubated with the plaque-containing filters for 2.5hr.
after washing with TBS plus 0.05%Tween20,filters were incubated for 1hr with alkaline phosphatase-conjugated rabbit anti-goat IgG and washed as described above.
immunopositive signals were detected with the chromogens nitroblue tetrazolium and bromochloroin-dolyl phosphate,and the corresponding plaques were excisedwith sterile pipette tips.
after overnight elution of phage in 1mM of 10mM tris-hcl plus 10mM Mgcl2.a portion was diluted 1:2000and 20μl was used to seed nutrient plates for testion of positives.

回答No.1

nao0_0nao · ベストアンサー

前回も回答したので再登場です（笑）。

論文の一部でしょうか？
抗体を用いたライブラリーからのスクリーニングですね。
この方法でしたら、分子生物学の基本ですので、
多くの実験書や教科書に図入りで記載されていると思います。
ただし、最新の方法を中心とした本には載っていないかもしれません。

簡単にいうと、発現ファージベクターを用い、
lacZとの融合タンパク質としてcDNAを発現させ、
抗体によりスクリーニングする方法です。

Molecular Cloning (A Laboratory Manual) という実験書があるのですが、
かなり詳細に説明されています。理系の大学でしたら、図書館や研究室には
必ずあると思いますよ。特に「Screening Expression Libraries with
Antibodies and Oligonucleotides」の章を読んでみて下さい。

お礼

前回に引き続きありがとうございました。
参考書まで紹介してくださってありがとうございます。
早速図書館で確認してみたいと思います。