少ない細胞からRNAをきれいに、ロスなく、とる方法

質問

5000個の細胞からRNAをとりたいと考えています。
しかも、きれいに、高濃度で、ロスなし。
という無理な条件でも、「できるぜ、、」という方は、
いらっしゃいませんでしょうか？

ちなみにQiagen RNeasy miniカラムでいけるという経験をお持ちの方、
同じく、Qiagen Fastlane kitで上手くとれるという方、
是非ご一報ください。

何卒、よろしくお願いいたします。

回答No.2

noname#246619

経験者ではないので何とも言えないのですが、参考URLにあるような微量RNA用のキットはいかがでしょうか。

参考URL：

http://www.appliedbiosystems.co.jp/website/jp/event/campaignpage.jsp?EVENTCD=108594

お礼

ご意見頂戴し、誠にありがとうございます。

RNAqueous® -Micro Kit （アプライドバイオシステムズ）
こちらを拝見いたしました。

印象としては、キアゲンよりも微量サンプルには適していると思われました。ただ、カラムの充填量が不明なため、いま少し不安です。カラムの容量が多ければ、それだけ溶出時のロスが大きくなります。

自分も独自に調べた結果
PicoPure RNA isolation kit (Arcturus社)というキットがかなり小さなカラムを使っており、適しておるのではないかと思い試して見ることにしました。
http://www.arctur.com/research_portal/products/picorna_main.htm
http://www.bmbio.com/product/lcm/04.htm

回答No.1

Dr_Hyper

ちなみに、ご自身が培養細胞などで同じ条件で行われて、どれくらいのものが、どれくらいの量とれているのでしょうか？
気をつけてらっしゃることなど補足していただけますか？

補足

ご回答ありがとうございます。

まだ、他の培養細胞では経験がありません。
1×10の5乗個程度もあれば、500～1000ngくらいのRNAがとれていたと覚えています（キアゲン、RNeasy Mini colum）。

気をつけていることとしては、特に最後の溶出量で、他は特に問題ないと感じています。20-30µlのRNase-free water で溶出していますが、これより少ないとロスが多いのではないか不安になります。

以上、補足させていただきました。