E-ロゼット形成試験について

質問

免疫検査学（一部、血液検査学も含む。）の質問内容なのですが………。

リンパ球のサブポピュ－レ－ションの検出法のお話です。
↑サブポピュ－レ－ションの検出法って、何ですか？

と、(1)E-ロゼット形成試験
　　(2)EA-ロゼット形成試験
　　(3)EAC-ロゼット形成試験
　　　　の違いが、分かりません。（違いについて、教えて下さい。）

また、血液学的なことなのですが……
　末梢血　血液像での割合のことなのです。
　　リンパ球の中の、T細胞とB細胞の割合が、分かりません。
　　　それと、T細胞とB細胞の鑑別の仕方が、分かりません。
　　　　　　　（T細胞とB細胞の不明な点について、教えて下さい。）

これらのことが、分かる方は、詳しく、教えて下さい。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　宜しくお願いします。

回答No.1

Hobab · ベストアンサー

＞リンパ球のサブポピュ－レ－ションの検出法のお話です。
＞↑サブポピュ－レ－ションの検出法って、何ですか？
　リンパ球は、末梢血の塗抹標本では、一様な形状をしていますが、機能などの面から、T細胞、B細胞、NK細胞などの亜群（サブポピュレーション）に分類されます。
　リンパ球のサブポピュレーション（Subpopulation）の分類（検出）は、白血病などの疾患の診断や治療に必要です。

＞(1)E-ロゼット形成試験
＞(2)EA-ロゼット形成試験
＞(3)EAC-ロゼット形成試験
＞の違いが、分かりません。（違いについて、教えて下さい。）
　E-ロゼット形成試験は、私は、昔、かなりの検体を扱いました。
　E-ロゼット（E-rosette）は、ヒツジの赤血球（E）が、リンパ球の細胞表面に結合するか調べます。
　E-ロゼットを形成するリンパ球は、T細胞が多いです。
　E-ロゼットを形成するリンパ球は、細胞表面にCD2（LFA-2）と言う蛋白（インテグリン）を有していて、羊赤血球（の細胞表面の蛋白）と結合し、ロゼットを形成します。
　E-ロゼットは、T細胞以外に、NK細胞も形成します（低親和性）。
http://hobab.fc2web.com/sub4-E-rosette.htm

　EA-ロゼット形成試験は、実際に行った経験はありませんが、
　EA-ロゼットは、ウシの赤血球に、ウシの赤血球に対する抗体（IgG）を結合させ、抗体のFc部分が、リンパ球に結合するか調べます。
　EA-ロゼットを形成するリンパ球は、細胞表面にFc受容体を有していて、抗体（免疫グロブリン）と結合します。
　B細胞は、Fc受容体を有していて、EA-ロゼットを形成します。
http://bme.ahs.kitasato-u.ac.jp/qrs/imd/imd00302.html

　EAC-ロゼット形成試験は、ヒツジの赤血球に対するIgM抗体（IgG抗体を使用するとEA-ロゼットと区別出来ない）を結合させ、さらに、C5欠損マウス血清（C3を溶血なく赤血球に結合出来る）を加え、赤血球に結合したC3（補体）が、リンパ球に結合するか調べます。
　EAC-ロゼットを形成するリンパ球は、細胞表面に補体受容体を有するB細胞です。

　なお、E＝赤血球（Erythrocyte）、A＝抗体（Antibody）、C＝補体（Complement）の略だったと思います。

＞リンパ球の中の、T細胞とB細胞の割合が、分かりません。
　末梢血のリンパ球の場合、T細胞が約8割（55～85％）、B細胞が約2割（5～20％）です。
　骨髄血のリンパ球の場合、T細胞は25％以下、B細胞は75％以上と言われます。
　扁桃腺のリンパ球の場合、T細胞が50％、B細胞が50％と言われます。

＞T細胞とB細胞の鑑別の仕方が、分かりません。
　従来は、E-ロゼット形成細胞＝T細胞、表面免疫グロブリン陽性細胞（FITCなどを標識した抗ヒト免疫グロブリン抗体が結合する細胞）＝B細胞と同定していました。
　近年は、モノクローナル抗体とフローサイトメトリーを用いて、リンパ球表面抗原（表面マーカー）を検査するのが、一般的です。
　T細胞は、モノクローナル抗体を用いると、B細胞の抗体産生を促進するヘルパーT細胞と、ウイルス感染細胞などを破壊するキラーT細胞とに、鑑別可能です。

補足

詳しく、ご説明有難うございます。
すいませんが、本文中に、分からない所があったので、補足に書きました。
『フローサイトメトリー』って、どんなことですか？教えて下さい。

回答No.2

hobabsan

> 『フローサイトメトリー』って、どんなことですか？教えて下
> さい。
　「フローサイトメトリー」とは、簡略には、リンパ球を浮遊させた液を、細く流して、そこにレーザー光を当てて、分析する方法です。

　「フローサイトメトリー」は、当初、 「FACS」(ファックス：Fluorescence-Activated Cell Sorter）と呼ばれていました。
　「FACS」では、リンパ球を、蛍光色素を結合した抗体と反応させ、マイクロノズルから浮遊液を滴下させ（水滴にはリンパ球1個のみが含まれます）、レーザー光を照射します。抗体が結合したリンパ球（陽性細胞）は、蛍光を発するので、その蛍光を受光器で感知し、オシログラフ上に蛍光強度の違いにより陽性細胞の分布や、大きさを分析し、表示します。また、浮遊液のリンパ球を、偏向板を用いて、蛍光を発する細胞（陽性細胞）と、蛍光を発しない細胞とに、分離させて集めること（Sorting）が可能となりました。
http://www.geocities.jp/motomchan/crypto/method/cytometry.htm

　「フローサイトメトリー」を用いれば、顕微鏡で観察しなくても、ある抗原（CD分類で分類される血液細胞上の分子蛋白など）を、何％の細胞が、どの程度表面を有していて、その細胞がどの程度の大きさなのかを、分析することが可能です。
　また、ある抗原（蛋白）を有するリンパ球のみを、細胞浮遊液中から分離して、取り出すことが可能です（Sorting）。

　「フローサイトメトリー」は、ベックマン・コールターにより開発されました。
　「フローサイトメトリー」の詳細は、ベックマン・コールター株式会社のHPを御覧になると良いでしょう。
http://www.bc-cytometry.com/cytometry.html

お礼

2回も、分かりやすく、教えていただき、有難うございます。
要約、実習で、やった、意味が、分かりました。
本当に、有難うございました。