- ベストアンサー
高速液体クロマトグラフィーで‥
chemwalkmanの回答
- chemwalkman
- ベストアンサー率70% (67/95)
私の研究室では、こんな時、３次元のUV検出器を用います。３次元とは通常の時間軸と吸光度に波長が加わった機器です。 一回の測定でその成分のUV吸収も見る事が出来ます。 最近は島津やHPの機器が良く知られています。 どの波長が最適かは、どの成分を見たいかによりますが、反応の姿をよく表現できる波長を、この３次元検出器で判断しております。 一般的に低波長では、ご質問のように多くのピークがでます。もちろん、溶媒ピークも観察されます。 経験上、230～254nmの間で選択されるようです。
関連するQ&A
- 吸収曲線を作成する際の、分光光度計波長選択について
学校で「ビウレット反応で呈色させた試薬ブランク・蛋白液（牛アルブミン）の２つの溶液の吸光度を分光光度計で測定し、吸収曲線を作成する」という実験をしました。 その際、波長を長波長の７００nmから短波長の４００nmまで１０nmづつ順々に変え、極大吸収波長の近くでは２nmおきに変えて測定しました。 この“長波長から短波長”の順に吸光度を測定するというのには何か意味があるのでしょうか？どうかご存知の方、おりましたら教えて下さいっ！！
- 締切済み
- 化学
- クロロフィルaの蛍光スペクトル
実験で色素をクロマトグラフィーで分離した後、分離したクロロフィルaの蛍光スペクトルを測定したのですが、660nm辺りのピークの吸光度が0.2(濃度低)になるものを分光蛍光光度計で測定したところ励起スペクトルのピーク付近では異常はなかったのですが、660nm辺りの吸光度が1.8(濃度高)になるものを測定したところ励起スペクトルのピーク付近で放物線がくぼんでしまう(0.2では662nmがピーク波長として検出されたものが1.8の方は662nmがバレー波長として検出され、その前後の655nm,671nmがピーク波長として検出されました)異変が生じました。この異変はなぜ起きるのでしょうか?よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- 液体クロマトグラフィーについて、基礎的なこと
液体クロマトグラフィーについて質問です。 ある微生物の培養上澄中のAという物質の含有量を測定したいのですが、 その場合、スタンダードをAとし、まずAだけを液クロにかけピークを測定したのち、 培養上澄だけを液クロにかけ、Aと同じ時間にピークが出れば 培養上澄にAが含まれているということなのでしょうか。 液体クロマトグラフィー初心者なのでよく理解ができていません。 どなたか教えて頂ければ幸いです。
- ベストアンサー
- 化学
- 液体クロマトグラフィーのカラムのついて
こんにちは 私は現在、HPLC（液体クロマトグラフィー)を扱っております。 最近起きた珍事件です。 ODS（内径4.6mm×長さ15cm）のカラムを使用しております。そのカラムが分析中に今まで５、６分だいで出ていたピークが２分台に再現し始めました。 新しいカラムに変更しても初めは５、６分だいにピークだ現れますが、また少し経つと２分台にピークが出始めます。 とても急ぎの仕事があり、焦っています。 液クロの条件は下記のようになってます。 *移動相・・・ リン酸緩衝液：アセトニトリル（3：2） *カラム・・・STR-ODSII *流量 ・・・1.0ml/min *波長 ・・・254nm *試料は移動相で溶解しております。 なぜ保持時間が変るのですか？他の成分の定量にも同じ事が起こりました。 どなたか分かる方教えてください(><)
- 締切済み
- 化学
- 吸光度測定の波長について
吸光度の測定を実験でしたんですけど、 1000nmから200nmまでの範囲でしたんですけど、 なぜこの波長の範囲なんでしょうか？ 吸光度を調べる時に波長が極端に高かったら低かったらいけないのでしょうか？ またいろいろな文献を見て思ったんですけど 測定するときに波長が一番多いのは260nmだったんですけど、 何故２６０nmなんでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
- FITCの吸光係数について
蛍光色素である fluorescein isothiocyanate（FITC）の吸光係数についての質問です。 最大吸収波長である494nmの時の吸光係数（ε）は68,000 M-1 cm-1だと調べて分かりましたのですが、 吸収波長の値が280nmの時の場合の吸光係数（ε）はいくつの値になりますでしょうか？ いくら調べても見つからなくて困ってます。どうかよろしくお願いします。
- 締切済み
- 化学
- タンパク質の吸収スペクトル
あるタンパク質を精製し、その吸収スペクトルを測定しました。波長が280nm付近に一番大きなピークが見られ、300nm,400nm、500nm付近にも確認できました。 そこで、それぞれの波長でピークが見られることは何を意味しているのか教えてほしいです。ネットで調べると280nmのピークは一般的なタンパク質に見られ、タンパク質濃度を求めるのに使うと書かれていました。これは本当でしょうか？とするとそれ以外の波長でのピークはタンパク質によって違い、目的としたタンパク質が精製できたかを確認する指標となるのでしょうか？このことについて勉強するにはどのような分野の本が良いかも教えてください、よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
ありがとうございました。３次元の検出器は便利そうですよね。一度に見れてしかもＵＶスペクトルもみれますし・・・。欲しいです！ついでにＭＳも！ ２３０～２５４nmの波長ですね、試してみますありがとうございます。