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解決済み

RT-PCR法について

  • 困ってます
  • 質問No.97745
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お礼率 85% (6/7)

RT-PCR法を勉強していて疑問に思ったのですが、
cDNAを増幅した後、mRNAをつくるとき、作られたmRNAはcDNAとハイブリダイズしていると思うのですが、そのハイブリダイズしているcDNAはもう鋳型として使われることはないのですか?それとも一本鎖になって、またmRNAを作るための鋳型として使われるのでしょうか?
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質問者が選んだベストアンサー

  • 回答No.3
レベル7

ベストアンサー率 60% (6/10)

RT-PCRとは「reverse transcriptionでmRNAからcDNAを作り,このcDNAをテンプレートにしてPCRを行う」方法を指します.2つの反応は別々に行うのです.RT反応でテンプレートとなるmRNAは組織,細胞株などから抽出したものを用います.ですから,通常「mRNAをつくること」はありません.

遺伝子の発現の有無や量をmRNAレベルで調べるときやタンパクをバクテリアなどの系で発現させたいときなどにこの方法を使います.
お礼コメント
ymctaka

お礼率 85% (6/7)

やっぱりそうだっだのか、、、。
 インターネットで少し調べたとき、「RT-PCR法によるmRNAの検出」と書いてあるものがおおかったので、かってにmRNAを作ることが最終目的だと思い込んでいました、、、。
 とても勉強になりました。どうもありがとうございます。
投稿日時 - 2001-07-02 18:06:06
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その他の回答 (全2件)

  • 回答No.1
レベル7

ベストアンサー率 60% (6/10)

>cDNAを増幅した後、mRNAをつくる
というのはどの段階のことですか?

RT-PCR法は

抽出RNA
 ↓ RT(逆転写反応)
cDNA
 ↓ PCR
PCR product

のような流れですが.

それともこの前,もしくは後にin vitroでmRNAをつくらせるということですか?
補足コメント
ymctaka

お礼率 85% (6/7)

>cDNA
   ↓ PCR
 PCR product
の段階でmRNAが作られると私は解釈していたので、この段階のことをさしているのですが、、、。
>抽出RNA
  ↓ RT
 cDNA  の段階でもできるのでしょうか?
まだ、勉強したてなもので、間違った解釈をしているのかもしれません。
もしよろしければ、そこのところも教えてください。 
投稿日時 - 2001-07-01 01:24:44


  • 回答No.2
レベル10

ベストアンサー率 33% (48/142)

若干誤解があるかもしれませんね。
生物の体内でゲノムDNAから転写されてできるのがmRNA。
このmRNAを逆転写(RT)してできるのがcDNA。
普通、PCRでcDNAを増幅してもmRNAにはなりません。
増幅されたものはcDNAです。
ちなみに2本鎖のcDNAはどちらも鋳型になります。
お礼コメント
ymctaka

お礼率 85% (6/7)

勘違いしていることが解決いたしました。
 mRNAを作るところも反応に含まれていると思い込んでいましたが、
違うのですね。PCR法については、理解できたのですが、RT-PCRはどこを調べていいのかわからなくて、、、。
 でも疑問が解決してよかったです。ありがとうございました。
投稿日時 - 2001-07-02 18:12:11
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