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ライゲーションと脱リン酸化

基本的な質問ですみません、セルフライゲーションを防ぐためにベクターを脱リン酸化するらしいというのは分かるのですが、脱リン酸化された末端にインサートをくっつけることはできるのですか？

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回答No.1

インサートのほうにリン酸基がついているのでくっつきます。 5'リン酸基と3'水酸基でligationが起こりますので、ベクターを脱リン酸すると5'のリン酸基がとれてインサートの3'水酸基とはligationが起こらなくなります。しかし、インサートには5'リン酸基があるのでベクターの3'水酸基とligationが起こります。二重鎖のうち、片側鎖だけligationが起こって反対鎖にはニックが残った状態です。

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