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ライゲーション

ベクターにinsert DNAを1種類の制限酵素でライゲーションする際，ベクターは制限酵素で切断後，アルカリ性フォスファターゼ処理をして，リン酸基を水酸基にかえてセルフライゲーションを防ぎます． しかし，この状態ではinsert DNAとベクターは２本鎖のうちの１本鎖だけでライゲーションすることになるのですか？？もう片方の鎖は両方とも水酸基になっていますよね．insert DNAの方は3'-OHで，ベクター側はアルカリ性フォスファターゼ処理したので5'-OH． 実験は普通にうまくいっているのですが，原理がいまいちよく分かりません．

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
回答No.2

>ちなみにどんな大腸菌でもこの活性は持っているのですか？ たとえばnickは、DNA複製のとき必ず生じるので、これを修復できないmutantは、生存できないのではないでしょうか。

jikana
質問者

お礼

確かに． 何度もありがとうございました．解決しました．

その他の回答 (1)

回答No.1

はい、その通りです。ライゲーションがうまくいったとしても、片側鎖だけが結合して、反対側は、切れ目（nick）が残ったままです。これが大腸菌に導入されると、大腸菌のDNA修復系によってnickが修復され、スーパーコイルになるのです。

jikana
質問者

お礼

早速の御返事ありがとうございます． 大腸菌が繋げてくれるんですね． ちなみにどんな大腸菌でもこの活性は持っているのですか？この能力は特に遺伝子マーカーとして定義されていたりするのですか？簡単な遺伝子マーカーだけ取り上げている本を見たのですが，それらしいものが無かったので，一般的な能力すぎて定義されていないのですかね．

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