- 締切済み
ヒト抗体遺伝子をもつマウスを作製したいんですが
どのような手法を用いて作製したらいいのかがわかりません。 なにか参考になるページがありましたら教えてください。 作成に当たって、以下の条件を満たしたいと考えています。 条件に近いものがありましたら回答宜しくお願いします。 (1)IgE抗体産生可能 (2)ヒト抗体を発現するアミノ酸領域がわかる まだまだ知らないことが多すぎてなんともいえないのですが、どうしても作製方法を知りたいんです。 宜しくお願いします。
- 生物学
- 回答数1
- ありがとう数0
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
みんなの回答
- assault852
- ベストアンサー率48% (1364/2797)
質問ですみません。 あなたはどういう方ですか。 なんか、なんの知識もない方が突拍子もない質問をされているように思えるのですが。 専攻している学生とか、研究員とか、専門家の下で関連していることをされている方ではないのですか。
関連するQ&A
- ベクターに組み込む遺伝子のサイズ
膜蛋白をコードする遺伝子（Igf1r）をクローニングし、リコンビナント蛋白として発現させ、この蛋白に対するモノクローナル抗体を作成したいのですが、目的の蛋白は195個のアミノ酸より構成されています。 ベクターにもよるのでしょうが、どれ位のサイズでベクターに組み込めばよいのでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
- 免疫グロブリン
Q1:IgMって分泌されるときから5量体なんですか？それとも分泌されるときは単量体なんでしょうか？ Q2：Mφって液性免疫にも関与していると考えられますか？広義の意味では関与している、狭義の意味で関与していないと思うのですが・・・・？？ Q3:B細胞が分化することによってなる抗体産生細胞の抗体産生能って永久的なんですか？ Q4：IｇEとIgGは構造が異なるかどうかの問題ですが、同じ単量体で存在するが、アミノ酸レベルでの配列が異なるから違うと言えるのでしょうか？ Q5:抗原情報の記憶に関与しているのは、IgG産生Bセルだけでなくて、IgAやIgE等も存在しますよね？
- ベストアンサー
- 生物学
- 細胞株の遺伝子に変異を入れるには？
実験初心者の質問です。 もし良い参考書等ありましたら、教えてください。 ある細胞株で発現しているタンパク質の機能を調べるために、そのタンパク質の発現を抑える場合、RNAiという手法を使うのだと思いますが(他にもありますでしょうか？？)、過剰に発現させるとしたら、どんな手を使うのが手っ取り早いのでしょうか？ベクターに載せた遺伝子を細胞に組み込む事になるのですか？ また、そのタンパク質の配列の意味を調べるために、あるアミノ酸に変異を入れるとしたら、どうすれば良いのでしょうか？単純に変異を入れた遺伝子を組み入れたら、改変前のオリジナルの配列と持った遺伝子と混ざってしまうような気がするのですが、完全に入れ換えるには何か手があるのでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
- ＧＦＰ融合タンパク質と抗体が反応しません。何か良い方法はないでしょうか？
A：以下に、実験方法を書いたのですが、どこに問題があるのでしょう? B：ＧＦＰやその関連のタンパク質の融合タンパクを使われた方で抗体と反応しなかったことはありますか？ Aについて、 酵母細胞内で、GFP融合タンパクを発現させて、 蛍光顕微鏡観察で発現を確認しました。 そこで、 ・WesternでGFP抗体と反応させてみたましたが、 バンドがでません。 ・免疫沈降後SDS-PAGEやって見てもだめでした。 条件を代え、 １：抗体濃度を変えたり、抗体反応も、オーバーナイトにしました。 ２：Westernの条件で、PBSをTBSにしたりしました。 ３：Westernで使うタンパク抽出方法は「サンプルbufferでボイル溶解」から、 「１：集菌した酵母にサンプルbuffer・プロテアーゼインヒビターを加え、加熱（100度）２：ガラスビーズを加え、ボルテックスで破砕、加熱、３：遠心」に。 抗体は、マウスIgＧを使っています。 B:について、 論文で、ある種のGFPとの融合タンパクはWesternでは 抗体と反応しなかった。 と書いてあったものがあると、人づてに聞きました。 やはりTagをHAやＭyc、Fragに変えたほうが良いのでしょうか? 長々とすみません。書き方が的を得ていないかもしれませんが、教えてください。お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 非特異的IgE抗体の値（低値）について
先日、ある試験を受けるために、健康診断を受けました。その中で、非特異的IgE抗体の検査があり、基準値１６９IU/ml以下に対して、２７IU/mlでした。基準値が「以下」となっているので、「２７」は正常の範囲ととらえてよろしいのでしょうか？私は花粉症を持っているので、もっと高いと思っていました。あまりにも低い数値なのでちょっと不安です。高くて困っている方は多いようなのですが・・・。 ご回答お待ちしております。
- 締切済み
- ヘルスケア(健康管理)
- pSectag2B を用いたベクター構築と組み替え蛋白質を用いた抗体作成
現在pSectag2B発現ベクターを用いた組換え蛋白質の発現ベクターを構築しようとています。 (http://www.invitrogen.co.jp/catalogue/invitrogen/V900-20_001.shtml) 現在プライマーの構築を行っている段階ですが、どの制限酵素サイトをつけるかを考えています。 ＭＣＳの中央のあたりでつなげなければ(たとえばpSectag2BでいえばBamHIとXhoIの組み合わせ)、 N末C末両端に余計なアミノ酸残基が引っ付いてきてしまうと思います。 また、Histagとのリンカー部位も入ってきてしまいますので、生理活性に影響が出ないか少々心配なところです。 ORFの上流はできる限りシグナル配列の直下につなげたほうが良いのでしょうか？ また、リンカー配列もできるだけ短くしたほうが生理活性に影響が出る可能性は少ないのでしょうか？ さらに、上記の方法で作成した組換え蛋白質(仮に蛋白質Aとしておきます)を抗原としてマウスモノクローナル抗体(中和抗体)を作成しようと考えています。 抗原がマウスのもつその蛋白質Ａとホモロジーが非常に高いため、リンカー配列などを認識してしまうのではないかと考えています。 ホモロジーの高い抗原を用いて抗体を作成するのはやはり難しいのでしょうか？ ラビットのポリクロ抗体でも作ったほうがいいのでしょうか？ 念のため類似した質問がないか確認はしましたが、重複していたらすみません。 色々とあつかましい質問ですが、よろしくお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- ワクチン接種と抗体産生の機序
ワクチン接種からの抗体産生の機序について以下文で間違いがあったら教えてください！ (1)樹状細胞がワクチンを外因性抗原としてとりこむ (2)MHCクラスIIに抗原提示する (3)クローン選択されたヘルパーＴ細胞がCD４で抗原認識 (4)ヘルパーＴのIL－4によりB細胞活性化。IgM抗体産生 (5)B細胞が１次濾胞に移動。 (6)T細胞のCDLとヘルパーTのCD40によるT-B間相互作用 (7)これによりB細胞が増殖しだすと、樹状濾胞細胞と共に杯中心を形成 (8)分化増殖したB細胞のうち形質細胞はクラススイッチを起こす。 (9)抗体の可変部ではなく定常部において遺伝子の再構成が起こり、IgG抗体産生 (10)分化したB細胞のうちメモリーB細胞になり、リンパ節に残った者は2度目の感染に備える また、(1)の行程で、B細胞が直接BCRを用いて抗原認識する、と書いてある参考書がありますが 何が違うのでしょうか？？
- 締切済み
- 生物学
- 免疫学についての質問
免疫学を勉強している学生です。 基本的な問題で恥ずかしいのですが下の質問の答えが教科書を読んでもはっきりとわからないので教えてください＞＜ 問題は○×です。 できれば間違いを直して頂けると幸いです 1.寄生虫感染ではIgD抗体高値となる 2.細菌感染において最初に産生される交代はIgAである 3.T細胞は増殖しない 4.血中半減期がもっとも長いのはIgGである 5.IgEは強力な補体活性化作用をもつ 6.IgDはナイーブB細胞上に発現している 7.T細胞は免疫記憶に関与している
- ベストアンサー
- 生物学
- 膠原病 抗核抗体数値160
妻のことですが、先日、皮膚科にて蕁麻疹のｌｇＥ検査のついでに抗核抗体の検査をしたところＩｇＥが510・抗核抗体の数値が40倍とでました。そこで先生の診断でＩｇＥが高いのでジルテック錠とアンテベート軟膏・パスタロンソフトを処方されました。抗核抗体数値は女性で４０は良くあるので気にしなくて良いとの事でした。しかし、膠原病のことを調べると関節がいたくなるとか、蕁麻疹がでるような症状があるとわかり、最近足の指ｎ関節が痛いこともあり翌日整形外科に相談したところリュウマチと抗核抗体の血液検査を行いました。結果リウマチに関する白血球も正常値、ＣＲＰは0.11・ＲＦは0 抗ＣＣＰ抗体1.6 ＭＭＰ－３16.4（Ｌ）とでて特にリウマチの症状はないと言われました。 しかし抗核抗体のなかのＨＯＭＯＧＥＮＥＯ160倍（基準値0～79）ＳＰＥＣＫＬＥＤ160倍 残りの6項目は問題ないと出ました。そこで相談ですこの抗核抗体の160はどうとらえたらいいのでしょうか？特に妻の症状で気になるところもありません。肝臓の数値その他一般の血液検査項目も以上値は見当たりません。しいて言えば血圧が90/60の低血圧ぐらいです。2日続けて検査した結果でかた方で40でもうかた方が160の数値の変化が良くわかりません。検査方法がちがっているのか？もしかしたら前日より飲みだした蕁麻疹のくすりが翌日の抗核抗体の数値を高くしてしまったのか？もしお分かりの方、先生や薬剤師のかたがいらっしゃればご回答下さい。膠原病が心配です。アドバイスをお願いします。（最初の皮膚科の抗核抗体の検査結果の紙には40としか書かれていなく翌日の別な病院の検査結果の紙は8項目ぐらいの抗核抗体の結果がでていました）病院と血液検査機関はまったく別です。 以上です
- ベストアンサー
- 病気
- 免疫染色の方法について（モノクローナル抗体の場合？）
マウスを用いて免疫系関連の研究をしている修士2年です。研究室3年目にして恥ずかしいのですが質問です。 現在、ある内分泌器官を、DABを用いた酵素抗体法（ABC法）で染めて、あるペプチドを産生している細胞の頻度及び分布を調べようと思っています。用意した物とプロトコルは以下です。 ・組織サンプル（ブアン固定→パラフィン包埋→4μm切片） ・Elite ABC kit（内容：Blocking用Goat血清、biotin結合2次抗体、ABC溶液） ・1次抗体（Rabbit anti-（そのペプチド）antibody） プロトコル・・・通常の脱パラ、浸水化、抗原賦活化（一応）、内因性ペロキシダーゼ除去→kitのプロトコル（1次抗体は4℃o/n） この1次抗体は、ある先生に紹介されて知り合った他大のA教授に分与していただいたものです。A教授とは直接お会いしたことはなく、メールや参考文献も自分の指導教官であるB教授を通して受け取っています。A教授はこの1次抗体を自分で作成（既知のアミノ酸配列からペプチドを合成→ウサギに投与→血清から精製）して、その抗体を用いた染色で論文を沢山出しているような方です。その論文を参考にして、今回のプロトコルを組んで染色してみたのですが、全然うまくいきません。組織内の細胞がところどころポツポツ染まるはずなのに、赤血球と血管内皮細胞以外の組織細胞全部がベッタリと染まってしまうのです。A教授の染色で私の染色と異なる点は、動物がラットであること（問題のペプチドは両種で保存されていることが分かっている）、kitを使っていないこと（ABC法ではなくPAP法、発色は同じくDAB）のみです。 こんなことはA教授に聞けばいいのですが、うちのB教授は少々プライドが高いところがあって難しそうなのです。それに、B教授はもともと免疫染色が得意ではないようです。B教授は今のベッタリ染色像が正しい染色像だと思っていて、このまま私の論文まで持っていくつもりみたいですが、色々な参考文献を見ている私としては、このベッタリ具合は絶対何かおかしいのです。（でもB教授は私の意見はお構いなしです(ノд・。) ）だって本当は、下垂体のACTH細胞くらいくっきり染め分けることが出来る抗体なんです。先入観を差し引いても、ラットとマウスでこんなに違うとは到底思えません。 さて、長々と読んでいただいてありがとうございます。。。質問は以下です。 1．私の染色方法やkitで、「もしかしてここのミスかも・・・」と気になる点があったら教えてください。（モノクローナル抗体を使った染色にはもともと不慣れです。） 2．指導教官であるB教授に「待った！」をかけるために、いい策はないでしょうか？？？（この質問に関してはカテ違いかもしれませんが・・・。）
- 締切済み
- 生物学
