- ベストアンサー
モノクローナル抗体を作りたいのですが、、、
babanbabanbanbanの回答
>エピトープはひとつの蛋白上にいくつも存在するのですよね? そうですな。要するに抗体ができやすい配列かと。 >エピトープをコードする塩基配列はどうやったらわかりますか? 知りません。抗体ができてから調べるものでは? どこかその蛋白の抗体を作っているメーカーがあれば、エピトープを調べている場合があります。後はNCBIでそのエピトープ蛋白部分に該当する塩基配列を調べれます。 >その遺伝子をPCRでクローニングしリコンビナント蛋白として発現させるんですが、その遺伝子の設計時にポイントとかありますか? わかりません。 が、前に同じようなことをした時は、ベクターのマニュアルにそんなポイントが書いてありました。
関連するQ&A
- ベクターに組み込む遺伝子のサイズ
膜蛋白をコードする遺伝子(Igf1r)をクローニングし、リコンビナント蛋白として発現させ、この蛋白に対するモノクローナル抗体を作成したいのですが、目的の蛋白は195個のアミノ酸より構成されています。 ベクターにもよるのでしょうが、どれ位のサイズでベクターに組み込めばよいのでしょうか?
- ベストアンサー
- 生物学
- cDNAのクローニングについて
抗体Aと結合するタンパク質をコードする遺伝子(cDNA)をクローニングする方法を教えてください。 実はこれはある問題で、「PCR、アミノ酸配列、プライマー、精製、データベース」の用語を用いて説明するように書いてあるのですが、インターネットで「cDNAクローニング」といれて検索しても、詳しく中身が書いていなくて、よく分かりません。 自分なりに考えてみると、「タンパク質を精製して、そこからcDNAを抽出し、それをプライマーを用いてPCRで増幅させ、塩基配列を調べて、・・・。」 問題に答えているのか、合っているか分からないですし、行き詰まってしまいます。 タンパク質を精製する方法や、タンパク質からcDNAを抽出する方法があるのかも分かりません。 長々と書いてしまいましたが、よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- フレームをあわせるということ(組み換え蛋白の作製)
大変初歩的な質問なのですが、3つずつ蛋白を読むように発現ベクターを選ぶというのはわかるのですが、インサートに用いる遺伝子でORF以前の塩基は少ない方がよいのでしょうか?PCRで増幅させたDNAを制限酵素処理→TAクローニングでライゲーションさせています。 ORF手前20塩基ほどついています。 GST融合蛋白として発現させているのですが、GSTのみが発現していました。
- ベストアンサー
- 生物学
- 細菌の酵素遺伝子の解析について
私は現在卒業研究で最近の酵素遺伝子の構造解析(要はクローニングしたい)をしていますがなかなか目的の遺伝子が引っかかりません。 現状はたんぱく質のN末端解析により20アミノ酸が同定されそこから推定される塩基配列を様々なプライマーでPCRをかけて60塩基を決定しました。そして他の細菌の同じ酵素のアミノ酸配列からコンセンス配列もいくつか見つけPCR しても遺伝子はひっかかりません。制限酵素で切ったりもしていますがうまくいきません。 遺伝子解析にあたってアドバイスをお願いします。 あとその酵素タンパクの抗体は得られているのですが、抗体をプローブとして解析を進めると聞いたことがあるのですがサザンのことなんでしょうか?でもあれは DNAプローブですよね?うーんよくわかりません。 ヒトゲノムが解明される時代に細菌の遺伝子一つくらい数日、数週間あれば解析できるということを聞きましたが本当でしょうか?そんな研究期間ではどのように解析しているのでしょうか?
- ベストアンサー
- 生物学
- E.coliのIRES
大腸菌を用いて、バイシストロニックにリコンビナント蛋白質を発現精製したいのですが、発現させたい遺伝子と遺伝子の間にどのような配列を入れればいいのか知りたいのですが、教えていただけないでしょうか?よろしくお願いします。
- 締切済み
- 科学
- PCRのプライマーって
ある遺伝子をゲノムからクローニングしてきてタンパク発現を行おうとしています。 しかし、PCRの段階でcDNAが増えません。 増えない理由として、プライマーの設計が間違っているからと指摘を受けました。遺伝子操作にはだいぶブランクがあるので、あまり自信がないのですが、 例えばgenebank などで検索したある遺伝子の配列が AGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGTAG だとすると、 AGT側が5’TAG側が3’だという事で 5’側プライマー AGTGGGGG…→ 3’側プライマー CTACCCCC…→ と設計しました。 しかし、シーケンスの5'と3’を逆に捕らえていると指摘されたのですが…。 私の理解は間違ってたんでしょうか。 そんなことないと思うんですが・・。 ちょっと自信がなくなったので聞きに来ました。 よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- タンパク質の発現について…。
久しぶりに質問させていただきます。融合GFPを取り扱う実験を行っているのですが、融合GFPがコードされたプラスミドDNA(Aとします。)から融合GFP部位の塩基配列を他のプラスミドDNA(Bとします。)に組み込む実験を行っています。PCRによって、ベクターBに融合GFP部位の塩基配列の導入が確認出来たのですが、いざこのプラスミドDNAからタンパク質を発現させ、抽出すると、GFP発光が全く確認出来ませんでした。 ホストベクターの種類によって、発現が抑制されるような事ってありますか?また、ライゲーションのやり方によって、3文字の認識コドンがずれる事とかあるのでしょうか? ちなみに、このクローニングでは、タカラバイオ様のIn_fusion酵素を用いています。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌を使った実験における注意点
今度遺伝子導入の発現とタンパク質の生成の実験をやるのですが、大腸菌内で異種遺伝子を大量発現させるための注意点を知りたいのですけど何かありますか? 自分は大腸菌の酵素が遺伝子の発現調節に関わる塩基配列を認識しないからなのかなと考えてますが、正しいのか確信がもてません。 どなたか教えてください。
- 締切済み
- 生物学
お礼
なるほど!! そうですよね、抗体ができたらそれを調べればわかりますよね メーカーに問い合わせて聞いてみるのは、よいアイデアだと思いました。メーカーをこれから調べてみます ありがとうございました