リゾチーム結晶育成について

質問

最近、急にタンパク質結晶へ応用研究を行うことにしました。ただ、生化学分野の教養はほとんどなく、幾つかお聞きしたいことがございまして・・・。
リゾチームの単結晶を作成したいと考えていますが、これまで無機単結晶の研究室だったので生物分野の機器はほとんどありません。私の研究を行うためには、5mm以上のサイズの結晶が必要なのですが、そのためにどれ位の精度の恒温槽やその他薬品等が必要かわかりません。そもそも、5mm以上の結晶育成は可能でしょうか・・・？どれくらいの期間が必要でしょうか？
ちなみに、クエン酸緩衝液(PH5)、20％NaCl水溶液、10％リゾチーム水溶液でマルチプレート中20℃(借り物の恒温槽：数℃の誤差あり)で数日育成しましたが、1mm程度しか成長しませんでした。
比較的簡単に大きなリゾチーム結晶を育成する方法が分かる文献等(海外雑誌でも構いません)の推薦があれば、教えください。また、リゾチーム結晶自体についての英語文献も探しています。
もし可能ならば、結晶育成時の注意点・条件等についても教えてください。また、その他のタンパク質単結晶で、比較的簡単に5mm以上の結晶育成が可能なものがあれば教えてください。
長々と書いてしまいましたが、説明不十分かもしれません。もし何か一部でも助言していただければ幸いです。

回答No.3

umeumeume

１のものです。
全くの未経験ということでしたね・・・
初心者にも読んでそこそこ、把握できる本というと・・・
わたしが使っていた書籍の中に「新・タンパク質精製法　理論と実際」（発行所：シュプリンガー・フェアラーク東京株式会社）というものがあります。

基礎の基礎までは、行きませんが、装置や材料・試薬なども、そこそこ詳しく書かれていると思います。
タンパク質（酵素）の抽出から結晶化までが流れとなっている本です。
出版社のＨＰは、下記です。
お値段もそこそこですので如何でしょう？？

参考URL：

http://www.springer-tokyo.co.jp/default.shtml

お礼

是非参考にしてみます。ありがとうございました。

回答No.2

noname#29428

全くの素人ですが，巨大な卵白リゾチームの結晶写真をURLで見たことがあります。ですから実現可能ではないかと思います。しかし，探しても見つかりません。確か，下記の方ではなかったかと思います。

○安宅光雄（生命研）
「塩濃度勾配を利用した卵白リゾチームの巨大単結晶作製」
reviewが見つかりません。ご自分でお探しください。

◎良質なタンパク質結晶を得るための基本戦略 　ご存じとは思いますが…
http://www.cir.tohoku.ac.jp/sazaki-p/%20Web_pages/Protein_crystallion/04_Basic_strategies.html

お礼

探してみます。見つかればうれしいのですが・・・
東北大のHPは前に拝見しました。ただ。巨大な結晶を作るための、実際の方法までは見つけることが出来なくて・・・
もし、新しい情報があったら、また教えてください！ありがとうございました。

回答No.1

umeumeume

わたしも、タンパクの結晶を作成したことがありますが、
5mmというのは作ったことが無いです・・・
ので、下のHPではどうでしょうか？
一応、参考文献もあるようですし・・・
一番の原因は純度もあると思いますけど（純度を上げるのが大変とも・・・）

参考URL：

http://www.cir.tohoku.ac.jp/sazaki-p/%20Web_pages/Protein_crystallization.html

お礼

ありがとうございます。上記のWebは拝見したことはあるのですが・・・じゃ、実際に作るにはどうしたたらいいんかっていう基本的なことまではかいてなくて。しかも、私は生化学の実験をほとんどしたことないので、基本操作や道具の精度とかもよく分からなくて・・・・