• ベストアンサー

HPLCのピークについて教えてください!

HPLC初心者です。 質問させていただきたいのですが、 HPLCで分析する化合物のピークというものは、決まっているのでしょうか? 例えば、分析したい化合物Aのピークは、大体どの文献を読んでも4,5分に見えるようです。 しかし私がその化合物Aを水に溶かしたものをスタンダードとして分析すると、毎回3分あたりにピークが見えます。 一つだけ大きなピークが出るので、化合物Aだということは明らかと言えるのですが、 自分が設定した分析条件では、化合物Aはこの時間帯にピークが見えるということで良いのでしょうか。 分かり難い文章で申し訳ありません。 どなたかアドバイスお願い致します。

  • 化学
  • 回答数4
  • ありがとう数1

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
  • tir70
  • ベストアンサー率62% (71/113)
回答No.3

>では、文献のデータは参考程度で、自分のデータが正しいと確定して良いということでしょうか。 amanatsukoさんが分析で凡ミスをしておらず、かつ、分析結果に再現性があれば、そう確定してもよいと思います。 >毎回3分あたりにピークが見えます HPLCシステムのインストールの仕方にも依りますが、もしかしたら、化合物Aはカラムの中を素通りしていませんか?大丈夫という確信があればよいですが、そうでなければご確認を。

その他の回答 (3)

  • km1939
  • ベストアンサー率33% (59/176)
回答No.4

自分が設定した分析条件では、化合物Aはこの時間帯にピークが見えるということで良いの でしょうか。 基本的のは間違いありません。   移動層の流量をかえたときにピ-ク位置が変わるはずです、変わらなければカラムあるいは   設定条件の見直しが必要です。

amanatsuko
質問者

お礼

有難うございます。 流量を変えると、ピーク位置は変わりました。

  • tir70
  • ベストアンサー率62% (71/113)
回答No.2

1.使う分離モードを変えると,保持時間がガラッと変わる可能性が大いにあります。 2.同じ樹脂のカラムでも、カラムの長さが違うと、保持時間は違います。また,樹脂の劣化が進むと保持時間は変わります。 3.同じ分離モードのカラムでも、樹脂のメーカーあるいは同じメーカーでも樹脂の品番が違うと、保持時間は同じにならない可能性が大いにあります。 などが考えられます。

amanatsuko
質問者

補足

ご回答ありがとうございます。 では、文献のデータは参考程度で、自分のデータが正しいと確定して良いということでしょうか。

noname#160321
noname#160321
回答No.1

あなたの分析条件と文献の分析条件が完全に一致しない限り保持時間は一致しません。 条件が違うのに保持時間が一致したら「偶然」か悪いときには「壊れている」のです。 クロマトグラフィーは「分離」で性能を測るものであり、保持時間で測るものではありません。 他のサンプルとともにインジェクトしてちゃんと分離すれば、正常なのです。 文献は参考にしかなりません。

amanatsuko
質問者

補足

ご回答有難うございます。 ということは、文献とは違う分析条件で分析を行った場合、文献と別のピークが出たとしても、それは化合物Aであるということで確定して宜しいのでしょうか。

関連するQ&A

  • HPLC 未知のピーク

    HPLCで核酸関連物質の分析をしています。未知試料を分析したとき、標準試料としてインジェクションしたものとはは明らかにRTが違う、大きなピークが現れました。このピークが何であるか推定するためには、どうしたら良いでしょうか?文献等で、RTを調べてある程度あたりをつけ、その物質の試薬を買って、同じようにHPLCにかけてみることくらいしか、思いつきません。よろしくお願い申し上げます。

  • HPLCの負のピーク

    HPLC初心者です。 HPLC分析結果に、どの物質を分析しても必ず1分台に負のピークが出てしまうのですが、 これはなぜなのでしょうか。 また、負のピークは本来なら出てはいけないものなのですか? わからないことばかりですみません。 どなたかお願い致します。

  • HPLCのピーク保持時間について

    HPLC初心者です。 ピークについて質問です。 ある物質Aのピーク保持時間が5.3、物質Bの ピーク保持時間が5.5 であることが分かっているのですが 物質AとBを水に溶かした物をHPLCで分析すると、 保持時間が5.3にまとまって1つになって出てきてしまいます。 保持時間が0.2程度しか違わない物質を別々に検出するにはどうしたら良いのでしょうか。 感度を変えたら良いのでしょうか… どなたか教えていただけると嬉しいです。

  • HPLCピークの同定について

    HPLCで初めて分析した成分のピークがどれか分からず困っています。 このメソッドはまだ開発途中で、取り敢えず分析できるか確認する為に行ないました。 測定したサンプルは以下の通りです。 (1)1、5、10mg/mlのSTD溶液(溶媒はミリQ水) (2)ミリQ水のみ(ブランク用、STDの溶媒でもあるため) (3)りん酸緩衝液(移動相に使用しているもの) (4)アセトニトリル(移動相に使用しているもの) 単純に(2)~(4)で現れなかったピークがSTD(分析対象成分)だと考えたのですが・・・。 STDでは3分あたりに形が変な大きなピークが現れたのに対して(2)~(4)にはそのピークはなく、 STDの8分あたりにそこそこきれいなピークがあって(2)~(4)にはない。 この結果から、3分あたりに現れた大きなピークが分離に失敗したSTDなのか、 8分あたりに現れたそこそこきれいなピークがSTDなのか、分からないのです。 8分あたりに現れたピークは、面積がきちんと濃度によって比例していました。 しかし、これがSTDだと断言できるかといったら、正直不安です。 どのようにしたらRTが分からない成分を特定することができるのでしょうか? 分かり難い質問になってしまい申し訳ありませんが、ご意見を伺えたら幸いです。 宜しくお願いします。

  • HPLC分析について。初心者で困ってます!

    水と、含有量を測定したい物質Aを混ぜたものをスタンダードとし、HPLCで分析したところ、ピークが10つほど出ました。 スタンダードには水と物質Aしか入っていないはずなのに、なぜ10つもピークが出たのでしょうか。 そのピークの中でも一番大きいピークのものが、物質Aであるということなのでしょうか? 初歩的な質問で申し訳ありませんが、どなたか回答お願いします。

  • HPLCのピーク時間の誤差

    同じ物質をHPLC分析した時、ピーク時間は0.1程度は誤差が出るものなのでしょうか。 例:物質Aを分析すると1回目は4.55に、別の時には4.65でピークが出てくる

  • HPLCの負のピーク

    HPLCで目的物の正のピークの後に、 ピークがベースライン付近に戻ったところから、 負のややブロードなピークが必ず出てきます。 どなたか原因と対策をご存じないですか? カラム:SHODEX SP0810(糖分析用カラム) カラム温度:80度 移動相:水 サンプル:しょ糖水溶液

  • HPLCの溶媒ピーク

    HPLCの溶媒ピークについて質問です。現在、あるサンプルをUV検出器を利用してHPLC分析おこなってます。移動層はアセトニトリルと水&0.1%リン酸のグラジエントです。サンプルはメタノールに溶解して10μLでインジェクトしてます。標準曲線のR2も0.95以上の値がでてます。 何が疑問なのかというと、メタノールのみでインジェクトした時(気になってやってみました。)、メタノール溶媒のピークが標準サンプルのピークとまったく同じ場所に同じようにでてしまうのです。ピークAreaは標準サンプルの0.01mg/mlと同じくらいの値です。これはどうしてでしょうか?シリンジをよく洗浄しても同じようにサンプルとほぼ同じ場所にピークが検出されます。原因がよくわかりません。 ご教授お願い致します。

  • 液クロの水由来のゴーストピークについて

    HPLCグレードの水を用いているにもかかわらず、 下のような条件で分析すると、50mAU以上の強度で水由来のゴーストピークが必ず出ます。 HPLCグレードの水でもしかたのない問題なのでしょうか? それとも品質に問題があるロットだったのでしょうか? HPLC初心者なので、どのように判断し対処したらよいのか分かりませんので、教えて頂けたら大変助かります。 【分析条件】 水-アセトニトリルのグラジエント 検出器:UV220nm または 260nm

  • GC、HPLCでのピークのテーリング、リーディングについて

    GC、HPLCのピークのテーリング、リーディングについて教えてください。 1.GCで分析を行い、昨日はきれいなピークであったのに、同じ条件、カラム、機器で本日分析したところ、明らかなテーリングが見られました。カラムのエージング、インサートの洗浄、ウールの交換をしたが改善しませんでした。他に解決のための方法はありますか?また、テーリングが急に発生した原因として何が考えられるでしょうか。 2.一般的に、GC、HPLCでピークのテーリング、リーディングを起こす理由は何でしょうか。 3.そもそも、なぜピークがリーディング、テーリングすると悪いのでしょうか。 いろいろまとめて質問をして申し訳ありません。お教え頂ければ幸いです。 よろしくお願いします。